In vitro metody chovu sladkovodních měkkýšů čeledi Unionidae v průběhu larválního stádia vývoje

Kateřina Nosková

Bachelor's thesis

In vitro methods for the culture of freshwater mollusks of the family Unionidae druring larval stage

Abstract:

Tato bakalářská práce je rozdělena na dvě části. První částí je rešerše, druhá část sestává z pilotního experimentu s glochidii druhu Anodonta anatina (Linnaeus, 1758). Cílem rešeršní části bakalářské práce je objasnit problematiku rozmnožování mlžů čeledi Unionidae v laboratorních podmínkách. V práci je pojednáváno o komplikovaném rozmnožování těchto mlžů v přírodních podmínkách. Je zde rozebrána historie in vitro chovů mlžů v laboratorních podmínkách vedoucí k dosažení úspěšné transformace glochidií bez hostitelské ryby. V práci jsou zmíněny faktory ovlivňující kultivaci glochidií. Řešenými faktory jsou především teplota kultivace, pH hodnota kultivačního média, úprava atmosféry pomocí CO2 inkubátoru nebo vhodná doba pro ukončení kultivace. Dalším řešeným tématem je složení kultivačního média. Pojednáváno je o jednotlivých komponentech potřebných pro sestavení celkového kultivačního média. Komponenty zahrnují živné médium, zdroj bílkovin v podobě séra či plasmy, antibiotika, antimykotika a zdroje lipidů. Hlavním cílem první části bylo shrnout in vitro metody chovu glochidií. Cílem praktické části této bakalářské práce bylo provést pilotní experiment zaměřený především na snadnou dostupnost a přípravu médií, která by prokázala transformaci glochidií druhu škeble říční Anodonta anatina. Dalším cílem bylo prokázat alespoň minimální hodnoty transformace bez použití CO2 inkubátoru, tedy bez úpravy okolní atmosféry regulující pH kultivačního média. Testovanými faktory byla rozdílnost dvou médií, M199 a DMEM, přítomnost pufru HEPES a výměna média 5. den kultivace, která měla podpořit transformaci glochidií. Výsledků transformace ale nebylo dosaženo. Příliš vysoké hodnoty pH na konci kultivace pravděpodobně neumožnily glochidiím dokončit transformaci. Řešenou otázkou byla i hodnota použitých antibiotik, zda nemohla být pro glochidia dávkou smrtelnou. Z výsledků je patrné, že tímto způsobem transformace dosáhnout nelze, přesto experiment poskytuje důležité informace z hlediska nastavení budoucích experimentů. Vhodným řešením by bylo otestování antibiotik na životnost glochidií, ale také úprava pH kultivačního média před započetím kultivace.

Abstract:

This bachelor thesis is divided into two parts. The first part of this work is a review, the second part includes a pilot experiment with Anodonta anatina (Linnaeus, 1758) glochidia. The target of the review section is a clarification of Unionidae mussels’ propagation in laboratory conditions. Thesis describes the complicated reproduction of these mussels in nature, history of in vitro methods for glochidia culture leading to reach success in transformation of glochidia without host fish. It is discussed about factors influencing cultivation of glochidia like temperature of cultivation, pH value of culture medium, adjustment of CO2 atmosphere with CO2 incubator or suitable timing of the end of cultivation. Another solved topic is the composition of culture medium, which includes individual components for mixing of complete culture medium. Components like artificial medium, source of proteins – plasma/serum, antibiotics, antimycotics and source of lipids. Target of the first part of this work was to summarize the methods of glochidia in vitro culture. The practical part of this work includes a pilot experiment focused on the availability and preparation of complete media to achieve successful transformation for Anodonta anatina without the use of CO2 atmosphere to regulate pH. The tested factors were the difference between two mediums, M199 and DMEM, the presence of buffer HEPES and exchange of culture medium on the fifth day of cultivation. However, the results of the transformation were not achieved. Glochidia probably did not metamorphose due to high ph values. Question is also the amount of used antibiotics, as it is possible, that there were used too much antibiotics. The results show that it is not possible to reach transformation by this way, but the experiment provides important results in terms of future studies settings. It would be appropriate to test the value of antibiotics on glochidia viability, and also to modify pH before the start of cultivation.

Keywords

in vitro, Unionidae, glochidium, mlži, chov

Keywords

glochidia, Unionidae, mussels, culture, in vitro

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 19. 4. 2018

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Karel Douda, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Bachelor programme / field:
Animal Science / Companion Animals