Úloha transkripčního faktoru HIF1alfa ve vývoji savčích neurálních kmenových buněk , in vitro charakteristika

Bc. Vojtěch Koníř

Diplomová práce

Role of transcription factor HIF1alpha in development of mammalian neural stem cells, in vitro characterization

Anotace:

Tato práce se zabývá vlivem HIF1α na neurální diferenciaci in vitro. Analyzovány byly dva systémy diferenciace myších embryonálních kmenových buněk. Tvorba embryonálních tělísek jako model spontánní diferenciace a kultivace neurosfér pro studium neurálního vývoje. Porovnání linií buněk standardních a deficientních pro HIF1α ukázalo, že HIF1α brání rané neurální diferenciaci. Druhá část práce je věnována transfekci plazmidovou DNA. Pro transfekci embryonálních kmenových buněk se ukázala vhodnější chemická transfekce, než elektroporace. Transfekce byla využita k obnově exprese HIF1α v ESC a z nich kultivovaných neurosférách. To vedlo k určitému poklesu exprese LewisX u mutantních neurosfér, tedy částečnému zvrácení fenotypu.

Abstract:

This thesis deals with the influence of HIF1α on neural differentiation in vitro. Two systems of differentiation of mouse embryonic stem cells were analyzed. Cultivation of embryonic bodies as a model of spontaneous differentiation and cultivation of neurospheres for the study of neural development. Comparison of the standard and HIF1α deficient cell lines showed that HIF1α prevents early neural differentiation. The second part of the thesis deals with the transfection of plasmid DNA. For transfection of embryonic stem cells, a more convenient chemical transfection than electroporation has been shown. Transfection was used to rescue expression of HIF1α in ESC and cultured neurospheres. This resulted in a certain decrease in LewisX expression in mutant neurospheres, a partial reversal of the phenotype.embryonic stem cells were transfected with a plasmid expressing HIFα followed by cultivation of neurospheres.

Klíčová slova

neurální kmenové buňky, myší embryonální kmenové buňky, neurogeneze, embryonální tělíska, neurosféry, HIF1α, transfekce, neural stem cells, murine embryonal stem cells, neurogenesis, embryoid bodies, neurospheres, transfection

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 7. 6. 2017
• Vedoucí: RNDr. Josef Večeřa, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie / Molekulární biologie a genetika