Optimalizace exprese a purfikace RADX proteinu

Bc. Michaela Jiříčková

Bachelor's thesis

Optimisation of expression and purification of RADX protein

Abstract:

Nedávno byl objeven nový protein RADX, který je považován za antagonistu proteinu RAD51 a jednoho z regulátoru homologní rekombinace. Protein RAD51 je jedním z klíčových proteinů homologní rekombinace a ve zkratce jeho funkce je vyhledávání homologní sekvence ve zbytku genomu. Tento typ oprav je velmi podstatný pro zachování genomové stability, jedná se o opravu pro buňku toxických dvouřetězcových zlomů, které se tvoří při replikaci a mají za důsledek výměnu genetické informace mezi sesterskými chromozomy. Také však tyto zlomy můžou vznikat v průběhu života buňky a neopravené vedou k mutagenezi. Má práce řeší problém exprese a purifikace proteinu RADX, a tedy zjištění nejvýhodnější strategie pro získávání proteinu RADX. Toto zjištění by mělo umožnit zkoumání funkce RADX a jeho vztahu k hlavním proteinům homologní rekombinace jako je RAD51, RPA, BRCA2, RAD52 a další. V mé práci bylo zjištěno, že nejvhodnější způsob získávání RADX je z hmyzích buněk a zachování funkčnosti proteinu bylo ověřeno vazbou k ssDNA.

Abstract:

Recently was discovered new protein RADX which supposed to be antagonist of RAD51 and one of regulator of homology recombination. Protein RAD51 is one of main proteins of homology recombination and simply his role is looking for homology sequence on the rest of genome. This type of repair is very important for recover genome stability, it is a repair of toxic double strand breaks, which are happening at replication and result in crossing – over between sister chromosomes. As well they can happen in life of cell and without repair they lead to mutagenesis. My work solve problem of expression and purification of protein RADX and it should show the best way for gaining protein RADX. This work should help with study of function of RADX and his relationship with main proteins of homology recombination like RAD51, RPA, BRACA2 RAD52 and other. In my work was found out that the best way of obtaining RADX is from insect cell and preserve of function was prove by binding to ssDNA.

Keywords

RADX, RAD51, Homologní rekombinace, Dvouřetězcové zlomy, RPA, Homology recombination, Double-strand breaks

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 5. 2018

Thesis defence

• Date of defence: 12. 6. 2018
• Supervisor: doc. Mgr. Lumír Krejčí, Ph.D.
• Reader: Mgr. Peter Kolesár, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry