Buněčné účinky nového imidazopyridazinového inhibitoru onkogenní kinasy FLT3-ITD

Monika KINNERTOVÁ

Bachelor's thesis

Cellular effects of novel imidazopyridazine inhibitor of oncogenic kinase FLT3-ITD

Abstract:

Akutní myeloidní leukemie je stále častěji se vyskytujícím onemocněním. Jednou z jeho příčin je vznik mutace v transmembránovém receptoru FLT3. FLT3 je tyrozinkinasovým receptorem, který je po navázání ligandu fosforylován a následně aktivuje proteiny podřízených signálních drah, čímž reguluje buněčnou proliferaci. Mutací receptor získává schopnost autofosforylace i bez přítomnosti ligandu, buňka ztrácí kontrolu nad proliferací a dochází k propuknutí akutní myeloidní leukemie. Je známo mnoho FLT3 inhibitorů, jejich použití však často komplikuje rozvoj buněčné rezistence, takže je potřeba hledat stále nové terapeutické přístupy. Analýzou proteinů pomocí western blottingu v FLT3-ITD pozitivní buněčné linii MV4-11 ovlivněné nově připraveným FLT3 inhibitorem s označením LGR8498 byla prokázána blokace FLT3 i FLT3-podřízených signálních drah MAPK/ERK a STAT5. Delším působením látky bylo indukováno zablokování buněčného cyklu v G1 fázi. Látka LGR8498 v použitém koncentračním rozsahu neovlivňuje buněčný cyklus FLT3-nezávislé linie Jurkat a výsledky tak naznačují dobrou selektivitu naší látky vůči FLT3-ITD pozitivním buňkám. Látka LGR8498 rovněž aktivuje kaspasovou dráhu a vykazuje mírný proapoptotický účinek na linii MV4-11, v použitých koncentracích ale převažuje její cytostatický účinek. Účinky LGR8498 jsou srovnatelné s klinicky testovaným FLT3 inhibitorem, quizartinibem, který na linii MV4-11 působí rovněž v nanomolárním koncentračním rozsahu.

Abstract:

Acute myeloid leukemia is an increasingly common disease. One of its causes is a mutation in the transmembrane receptor FLT3. FLT3 is a tyrosine kinase receptor that is phosphorylated upon ligand binding. Subsequently, FLT3 activates downstream signaling pathway proteins to regulate cell proliferation. By mutating the receptor gains the ability to auto-phosphorylate even in the absence of the ligand, the cell loses control over proliferation and acute myeloid leukemia develops. Many FLT3 inhibitors are known, but their use is often complicated by the development of cellular resistance. Therefore, it is necessary to search for new therapeutic approaches. Protein analysis by western blotting in the FLT3-ITD positive cell line MV4-11 affected by a newly prepared FLT3 inhibitor, LGR8498, demonstrated blockage of both FLT3 and FLT3-dependent MAPK/ERK and STAT5 signaling pathways. Prolonged treatment with the substance induced cell cycle blockage in G1 phase. The substance LGR8498 in the concentration range used did not affect the cell cycle of the FLT3-independent Jurkat cell line, and thus the results suggest a good selectivity of our substance towards FLT3-ITD positive cells. The substance LGR8498 also activates the caspase pathway and shows a mild proapoptotic effect on the MV4-11 line. However, the cytostatic effect is predominant at the concentrations used. The effects of LGR8498 are comparable to the clinically tested FLT3 inhibitor, quizartinib, which also acts on the MV4-11 line in the nanomolar concentration range.

Keywords

akutní myeloidní leukemie, FLT3-ITD, inhibitor

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 5. 2023

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Eva Řezníčková, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry