Efektivita stanovení KEL a RHCE genotypu plodu u aloimunizovaných těhotných žen

MUDr. Veronika DURDOVÁ

Doctoral thesis

The effectivness of KEL and RHCE fetal genotype assessment in alloimmunized women by minisequencing

Abstract:

CÍL STUDIE: Zhodnotit efektivitu stanovení KEL a RHCE genotypu plodu u aloimunizovaných těhotných žen minisekvenací. TYP STUDIE: Prospektivní kohortová studie NÁZEV A SÍDLO PRACOVIŠTĚ : Porodnicko gynekologická klinika LF UP a FN Olomouc, Ústav lékařské genetiky LF UP a FN Olomouc, Transfuzní oddělení FN Olomouc, Ústav lékařské biofyziky LF UP MATERIÁL A METODIKA:V letech 2001-2019 byl celkem u 366 těhotných žen v prvním a druhém trimestru stanoven KEL (n=327) nebo RHCE (n=39) genotyp plodu z volné fetální DNA cirkulující v periferní krvi pomocí minisekvenace. Genotyp plodu byl ověřen bukálním stěrem u novorozence. VÝSLEDKY: U 327 žen byl stanoven KEL genotyp (stanovení přítomnosti alely KEL1, která odpovídá přítomnosti erytrocytárního antigenu "K"), ve 2 případech analýza selhala (2/327), dále bylo vyloučeno 16 heterozygotních žen (KEL1/KEL2) a u 309 homozygotních žen (KEL2/KEL2) byl stanoven KEL genotyp u plodu. U 95,8 % plodů (296/309) a u 95,5 % novorozenců (295/309) byl stanoven genotyp KEL2/KEL2 a u 4,2 % plodů (13/309) a u 4,5 % novorozenců (14/309) genotyp KEL1/KEL2. Senzitivita byla 92,86 % a specificita 100 %. U 39 žen byl stanoven RHCE genotyp. U 22 žen byla stanovena přítomnost varianty genu RHCE, která odpovídá přítomnosti erytrocytárního antigenu "C"/"c". Bylo vyloučeno 5 heterozygotních žen (C/c). U 11 homozygotních žen (C/C) byl stanoven RHCE genotyp u plodu. U 64 % (7/11) plodů i novorozenců byl stanoven genotyp C/c, u 36 % (4/11) genotyp C/C. U 6 homozygotních žen (c/c) byl stanoven RHCE genotypu u plodu. U 67 % (4/6) plodů i novorozenců byl stanoven genotyp C/c, u 33 % (2/6) genotyp c/c. Senzitivita i specificita byla 100 %. U 17 žen byla stanovena varianta genu RHCE, která odpovídá přítomnosti erytrocytárního antigenu "E"/"e". Byla vyloučena 1 heterozygotní žena (E/e). U 16 homozygotních žen (e/e) byla stanoven RHCE genotypu u plodu. U 75 % (12/16) plodů i novorozenců byl stanoven genotyp e/e, u 25 % (4/16) genotyp E/e. Senzitivita i specificita byla 100 %. ZÁVĚR: Minisekvenace s využitím kapilarni elektroforézy umožnila spolehlivou detekci KEL a RHCE genotypu plodu z periferní krve těhotné ženy.

Abstract:

OBJECTIVE: To evaluate the effectiveness of the fetal KEL and RHCE genotype assessment in alloimmunized pregnant women by minisequencing. DESIGN: Prospective cohort study SETTING: Obstetrics and Gynecology Clinic of the Faculty of Medicine UP and the University Hospital Olomouc, Institute of Medical Genetics of the Faculty of Medicine UP and the University Hospital Olomouc, Transfusion Department of the University Hospital Olomouc, Institute of Biophysics of the Faculty of Medicine UP SUBJECT AND METHOD: In the years 2001 - 2019, 366 samples of pregnant women in the first and second trimester were assessed KEL (n=327) or RHCE (n=39) genotype from the free fetal DNA circulating in the peripheral blood by minisequencing. The genotype of the fetus was verified from the buccal smear of the newborn. RESULTS: The KEL genotype was assessed in 327 women (the presence of a variant of the KEL1 alele, which corresponds to the presence of the erythrocyte antigen "K". The analysis failed in 2 cases (2/327), 16 heterozygote women (KEL1/KEL2) were excluded and in the case of 309 homozygote women (KEL2/KEL2) the fetal KEL genotype was assessed. In the case of 95.8 % of the fetuses (296/309) and 95.5 % of the newborns (295/309), the KEL2/KEL2 genotype was assessed. In the case of 4.2 % of the fetuses (13/309) and 4.5 % of the newborns (14/309), the KEL1/KEL2 genotype was assessed. The sensitivity was 92.86 %. The specificity was 100 %. The RHCE genotype was assessed in 39 women. In the case of 22 women, the presence of a variant of the RHCE gene, which corresponds to the presence of the erythrocyte antigen "C"/"c", was assessed. 5 heterozygote women (C/c) were excluded. In the case of 11 homozygote women (C/C), the RHCE genotype was assessed. In the case of 64 % (7/11) of the fetuses and newborns, the C/c genotype was assessed, in the case of 36 % (4/11) the C/C genotype was assessed. In the case of 6 homozygote women (c/c), the RHCE genotype was assessed. In the case of 67 % (4/6) of the fetuses and newborns, the C/c genotype was assessed, in the case of 33 % (2/6) the c/c genotype was assessed. The sensitivity and specificity were 100 %. In the case of 17 women, the presence of the variant of the RHCE gene, which corresponds to the presence of the erythrocyte antigen "E"/"e", was assessed. 1 heterozygote woman (E/e) was excluded. In the case of 16 homozygote women (e/e), the RHCE genotype was assessed. In the case of 75 % (12/16) of the fetuses and newborns, the e/e genotype was assessed, in the case of 25 % (4/16) the E/e genotype was assessed. The sensitivity and specificity were 100 %. CONCLUSION: The minisequencing method using the capillary electrophoresis enabled a reliable detection of the fetal KEL and RHCE genotype from the peripheral blood of pregnant women.

Keywords

těhotenství, aloimunizace, volná fetální DNA, KEL a RHCE genotyp plodu

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2020

Thesis defence

• Supervisor: prof. MUDr. Marek Ľubušký, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Medicine and Dentistry

Doctoral programme / field:
Gynaecology and Obstetrics / Gynaecology and Obstetrics