Využití trombin generačního testu pro monitorování léčby hemofilie

Bc. Jana KOLENOVSKÁ

Diplomová práce

Utilization of thrombin generation assay for monitoring hemophilia treatment

Anotace:

Hemofilie je vrozená porucha krevní srážlivosti způsobená nedostatkem koagulačního faktoru VIII (hemofilie A) nebo faktoru IX (hemofilie B). Stanovení aktivity těchto faktorů je zásadní pro diagnostiku a následné monitorování léčby. Nicméně běžně používané laboratorní metody, jako je jednostupňová koagulační metoda a chromogenní metoda, nemusí být spolehlivé u některých pacientů, zejména pokud podstupují terapii emicizumabem nebo faktory s prodlouženým biologickým poločasem. Tato práce se zabývá otázkou, zda by pro tento účel mohl být využit trombin generační test založený na kontinuálním měření koncentrace trombinu v průběhu srážení vzorku plasmy. Cílem práce bylo analyzovat vliv aktivity faktorů VIII a IX na parametry trombin generačního testu a posoudit, jak analytické podmínky a přípravky pro léčbu hemofilie ovlivňují výsledky této metody. Výsledky ukazují, že snížená aktivita faktoru VIII v plasmě se projevuje stejně jako snížená aktivita faktoru IX, konkrétně prodloužením času do dosažení maximální koncentrace trombinu (Time to Peak) a snížením maximální (Peak) a celkové koncentrace trombinu (AUC, ETP). Nebyla jednoznačně prokázána závislost délky času do nástupu generace trombinu (Lag Time) na aktivitě daného koagulačního faktoru. Faktory s prodlouženým biologickým poločasem mají stejný vliv na parametry trombin generačního testu jako nativní faktory VIII a IX. Emicizumab výrazně zkracuje čas do nástupu generace trombinu, a to i při nízkých koncentracích, ale ostatní parametry ovlivňuje méně. Podle výsledků této metody bylo možné odlišit pacienty s těžkou a středně těžkou hemofilií od přenašeček a zdravé populace. Nepodařilo se však spolehlivě rozlišit pacienty podle tíže hemofilie. Citlivost trombin generačního testu může být zvýšena použitím iniciačních reagencií s nízkou koncentrací tkáňového faktoru, což by mohlo být podkladem pro budoucí studie.

Abstract:

Hemophilia is a congenital bleeding disorder caused by a deficiency of coagulation factor VIII (hemophilia A) or factor IX (hemophilia B). Determination of the activity of these factors is essential for diagnosis and subsequent monitoring of treatment. However, commonly used laboratory methods, such as the one-stage coagulation assay and the chromogenic substrate assay, may not be reliable in some patients, especially if they are receiving therapy with emicizumab or factors with extended half-life. This paper addresses the question of whether a thrombin generation assay based on continuous measurement of thrombin concentration during clotting of a plasma sample could be used for this purpose. The aim of this thesis was to analyze the influence of factors VIII and IX activity on the parameters of the thrombin generation assay and to assess how analytical conditions and hemophilia therapeutics affect the results of this method. The results show that reduced factor VIII activity in plasma presents in the same way as reduced factor IX activity, namely by prolonging the time to maximum thrombin concentration (Time to Peak) and by reducing the maximum (Peak) and total thrombin concentration (AUC, ETP). The dependence of time to the onset of thrombin generation (Lag Time) on the activity of the given coagulation factor has not been clearly demonstrated. Factors with extended half-life have the same effect on the thrombin generation assay parameters as native factors VIII and IX. Emicizumab significantly shortens the time to the onset of thrombin generation, even at low concentrations, but has less effect on other parameters. According to the results of this method, it was possible to distinguish patients with severe and moderate hemophilia from carriers and healthy population. However, it was not possible to reliably differentiate patients according to the severity of hemophilia. The sensitivity of the thrombin generation test can be increased by using trigger reagents with low tissue factor concentrations, which could provide a basis for future studies.

Klíčová slova

Hemofilie A, hemofilie B, koagulace, koagulační faktor VIII, koagulační faktor IX, hemostáza, trombin generační test, emicizumab

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 23. 4. 2025

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Jana Úlehlová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie