Kvantifikace proteinů tylakoidních membrán rostlin aklimovaných na různou ozářenost BCA metodou

Kateřina GORGOLOVÁ

Bachelor's thesis

Quantification of thylakoid membrane proteins of plants acclimated to different irradiance by the BCA method

Abstract:

Tato bakalářská práce je zaměřena na stanovení obsahu celkových proteinů tylakoidních membrán izolovaných z rostlin pěstovaných na různé ozářenosti. Teoretická část práce je zaměřena na přehled literatury, která se zabývá kvantitativním stanovením proteinů v rostlinných vzorcích. Podrobněji je zpracována metoda stanovení bílkovin za použití bicinchoninové kyseliny (BCA). Stanovení celkového množství proteinů bylo provedeno spektrofotometricky pomocí metody využívající chelatace měďného iontu (vzniklého po redukci proteinem) kyselinou bicinchoninovou (BCA) za vzniku fialového komplexu. Stanovení bylo provedeno u tylakoidních membrán izolovaných ze semenáčku smrku ztepilého (Picea abies) pěstovaných při ozářenosti 20 ?mol m-2 s-1, 100 ?mol m-2 s-1 a 800 ?mol m 2 s-1. Byl pozorován nárůst obsahu proteinů (vztažených na celkový obsah chlorofylů) s rostoucí pěstební ozářenosti. Tylakoidní membrány izolované z rostlin pěstovaných při střední a vysoké ozářenosti vykazovaly dvojnásobně a sedminásobně vyšší obsah proteinů v porovnání s rostlinami pěstovanými při nízké ozářenosti. Toto stanovení celkového obsahu proteinů vychází z BCA metody doplněné o precipitaci proteinů pro odstranění vlivu interferujících látek.

Abstract:

This bachelor thesis is focused on determination of the amount of thylakoid membrane proteins of plants acclimated to different irradiance. The theoretical part of thesis offers an overview of the literature that deals with quantitative determination of proteins in plant samples. The method of protein determination using bicinchoninic acid (BCA) is described in more detail. Total protein determination was performed spectrophotometrically using copper chelation (produced by protein reduction) with bicinchoninic acid (BCA) to form a violet complex. The assay was performed on thylakoid membranes isolated from Norway spruce seedlings (Picea abies) grown at 20 ?mol m-2 s-1, 100 ?mol m-2 s-1 a 800 ?mol m-2 s-1. An increase in protein content (based on total chlorophyll content) was observed with increasing cultivation irradiance. Thylakoid membranes isolated from plants grown at medium and high irradiance exhibited twice and seven times higher amount of protein compared to plants grown at low irradiance. This determination of total protein content is based on the BCA method supplemented with protein precipitation to remove the effects of interfering substances.

Keywords

bicinchoninová kyselina, kvantifikace proteinů, precipitace, smrk, tylakoidní membrány

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 24. 6. 2019

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Date of defence: 15. 8. 2019
• Supervisor: Mgr. Irena Kurasová, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Applied Physics / Biophysics