Příprava a purifikace isopentenyltransferas v rostlinném expresním systému

Helena ŽENOŽIČKOVÁ

Bakalářská práce

Heterologous expression of isopentenyl transferases in planta

Anotace:

Bakalářská práce se zaměřuje na hojně využívaný modelový organismus Physcomitrella patens, který se řadí mezi vývojově staré organismy s dominantní haploidní fází. Jedná se o mechorost, na jehož vývoji se výrazně podílí fytohormony, jako jsou cytokininy nebo auxiny. Právě biosyntéza cytokininů je u P. patens zprostředkována daleko častěji tRNA-IPT dráhou než adenylátovou dráhou, která je naopak častější u vyšších rostlin. Genom Physcomitrella patens obsahuje sedm genů kódujících enzym isopentenyltransferasu (IPT). V rámci této práce byly studovány čtyři vybrané geny kódující tyto enzymy. Jako součást experimentální práce bylo připravit vhodné binární vektory nesoucí jednotlivé geny PpIPT1, PpIPT3, PpIPT4 a PpIPT6 označené pomocí reporterového genu GFP. Dále byla provedena transientní exprese PpIPT v rostlinném expresním systému Nicotiana benthamiana.

Abstract:

The bachelor thesis focuses on the model organism Physcomitrella patens, which is one of the evolutionary old organisms with the dominant haploid phase. Phytohormones, such as cytokinins or auxins, have been implicated in the development of Physcomitrella patens. In particular, cytokinin biosynthesis is mediated more frequently by the tRNA-IPT pathway in P. patens than by the adenylate pathway, which in turn is more common in higher plants. Genome of Physcomitrella patens encodes for seven isoforms of isopentenyl transferase (IPT). Four IPT genes were studied in the framework of this work. In experimental part four binary vectors carrying PpIPT1, PpIPT3, PpIPT4 and PpIPT6 genes fused with reporter gene GFP were prepared. Four PpIPT proteins were transiently expressed in planta (Nicotiana benthamiana).

Klíčová slova

cytokininy, isopentenyltransferasy, biosyntéza cytokininů, infiltrace listů, western-blot, GFP, epifluorescenční mikroskopie, Physcomitrella patens, Nicotiana benthamiana, vektor, tRNA-IPT a adenylátová dráha

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 6. 2019

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. David Zalabák, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie