Vztah histopatologických a molekulárně cytogenetických markerů na modelu vybraných solidních nádorů in vitro

Mgr. Tomáš Loja, Ph.D.

Disertační práce

Relationship between histopathological and molecular cytogenetic markers on chosen solid tumors in vitro

Anotace:

Předkládaná disertační práce se zabývá charakterizací 10 vybraných buněčných linií, které byly derivovány ze 4 typů solidních nádorů - multiformního glioblastomu (GM7, GM10, HGG-02), meduloblastomu (MBL-03), neuroblastomu (NBL-01, NBL-06) a osteosarkomu (OSA-01, OSA-02, OSA-03, OSA-05). Ve všech případech se jedná o velice agresivní tumory s nepříznivou prognózou pro pacienta. U všech linií byl pomocí molekulárně cytogenetických a imunodetekčních metod proveden základní screening diagnostických a případných prognostických markerů. Exprese proteinu intermediárních filament nestinu byla prokázána v buněčných liniích derivovaných ze všech typů nádorů, které byly v rámci této práce hodnoceny. Byl tak jednoznačně potvrzen status nestinu coby markeru nádorově transformovaných buněk. Nález nestinu u buněčných linií derivovaných z osteosarkomu, tedy z nádoru mesenchymálního původu, je toho dalším přesvědčivým důkazem a rozšiřuje spektrum poznatků o fakt, že exprese nestinu není vázána pouze na nádory neuroektodermálního původu. Nepodařilo se však prokázat žádnou korelaci mezi expresí nestinu a změnou jakéhokoli ze sledovaných genetických markerů u jednotlivých typů nádorů. Dalším významným morfologickým poznatkem je skutečnost, že přítomnost nestinu v buňce není omezena pouze na cytoplazmu, ale že nestin může být lokalizován i v buněčném jádře. Jeho funkce v buněčném jádře však zůstává stále nejasná a bude předmětem dalšího výzkumu. Posledním důležitým závěrem je průkaz buněčné subpopulace s fenotypem Nes+/CD133+ v buněčných liniích derivovaných ze všech typů hodnocených nádorů. Tento fenotyp je obecně považován za marker nádorově transformovaných buněk u neurogenních nádorů, detekce této buněčné subpopulace proto nebyla překvapivá u linií derivovaných s glioblastomu, meduloblastomu a neuroblastomu. Zcela novým a zásadním poznatkem je však detekce buněčné subpopulace s fenotypem Nes+/CD133+ u buněčných linií derivovaných z osteosarkomu.

Abstract:

Presented thesis is focused on characterization of 10 cell lines that were derived from 4 different types of solid tumors - glioblastoma multiforme (GM7, GM10, HGG-02), medulloblastoma (MBL-03), neuroblastoma (NBL-01, NBL-06), and osteosarcoma (OSA-01, OSA-02, OSA-03, OSA-05). All chosen tumors are very aggressive with poor prognosis for patients. Diagnostic and possible prognostic markers were examined in all employed cell lines using molecular cytogenetic and immunodetection methods. Nestin was detected in all examined cell lines. These results indicate that nestin expression is not limited to the tumors of neurogenic origin only but can be also detected in osteosarcoma cell lines, i.e. in cell lines of mesenchymal origin. However, no correlation between nestin expression and any genetic alteration has been proven. Another very interesting result was a detection of nestin in GM7 cells with a stable localization of this protein not only in the cytoplasm but also in the cell nucleus. Although the role of nestin molecules in the cell nucleus remains still unclear, its participation either in chromatin organization or in the regulation of gene expression is hypothesized. The most important result was a detection of small cell population with Nes+/CD133+ phenotype in all cell lines, because this phenotype is considered to be a marker of cancer stem cells in neurogenic tumors. A completely new and unexpected result was obtained in osteosarcoma cell lines, in which the cells with Nes+/CD133+ phenotype were also detected, because the cells with this phenotype were still detected neither in osteosarcomas nor in cell lines derived from these tumors.

Klíčová slova

nádorové markery, nestin, CD133, nádorové buněčné linie, nádorové kmenové buňky, tumor markers, tumors cell lines, cancer stem cells

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 12. 2008

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 18. 12. 2008
• Vedoucí: prof. RNDr. Renata Veselská, Ph.D.

Masarykova univerzita

Lékařská fakulta

Doktorský studijní program / obor:
Všeobecné lékařství / Lékařská biologie