Monitoring efektivity reagencií pro transfekci plasmidové DNA

Bc. Jiří Toufar

Diplomová práce

Monitoring the efficiency of reagents for transfection of plasmid DNA

Anotace:

Transfekce je výkonný analytický nástroj umožňující studium funkce genů a genových produktů v buňkách. Při neustálé větším množství různých metod a transfekčních reagencií je stále důležitější jejich optimalizace a hledání nejvhodnějších podmínek pro danou buněčnou linii. Pro stanovení těchto podmínek byly v diplomové práci analyzovány tři komerčně dostupné transfekční kity pro přenos genů do buněčných linií HEK293, Huh7 a UKF-NB4. Míra účinnosti transfekce byla měřena na základě transfekce plasmidu s GFP do cílových buněk a detekce viability a procentuálního zastoupení fluorescentních buněk. Zjistili jsme, že na efektivitu transfekce má vliv nejen zvolená buněčná linie, ale i poměr transfektantu vůči plasmidové DNA, typ použitého média a délka samotné transfekce.

Abstract:

Transfection is a powerful analytical tool for studying the function of genes and gene products in cells. With an increasing number of different methods and transfection reagents, it is ever more important to optimize them and find the most suitable conditions for a given cell line. To determine these conditions, three commercially available transfection kits for gene transfer into HEK293, Huh7, and UKF-NB4 cell lines were analyzed in the diploma thesis. The degree of transfection efficiency was measured by transfecting the plasmid with GFP into target cells and detecting the viability and percentage representation of fluorescent cells. We observed that the efficiency of transfection is affected not only by the selected cell line but also by the ratio of transfectant to plasmid DNA, the type of medium used and the length of the transfection itself.

Klíčová slova

Transfekce, plasmid, GFP, viabilita, buněčná linie

Keywords

Transfection, plasmid, GFP, viability, cell line

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 7. 5. 2020

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Petr Michálek, Ph.D.

Mendelova univerzita v Brně

Agronomická fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Zootechnika / Živočišné biotechnologie