Mikrosatelitní nestabilita u pacientů s karcinomem tlustého střeva a konečníku

Veronika Lišková

Bakalářská práce

Microsatellite instability in colorectal cancer patients

Anotace:

Hereditární nepolypózní kolorektální karcinom (HNPCC) je dědičné onemocnění způsobené zárodečnými mutacemi mismatch repair (MMR) genů (hmlh1, hmsh2, hmsh6 a hpms2), které za normálních podmínek opravují chyby vzniklé při replikaci DNA. Fenotypovým projevem mutace MMR genů je mikrosatelitní nestabilita (MSI), projevující se odlišným počtem repetic v mikrosatelitových lokusech mezi vzorky DNA nádorové tkáně a referenčního vzorku (například buňky kostní dřeně nebo krev) téhož pacienta. MSI se vyskytuje u 90 % HNPCC a 10 až 15 % sporadických kolorektálních karcinomů (KRK). Pacienti s vysokou mikrosatelitní nestabilitou mají příznivější prognózu v reakci onemocnění na terapii a v pravděpodobnosti metastázování do lymfatických uzlin a okolních orgánů. V rámci bakalářské práce byla provedena retrospektivní studie MSI u souboru čtyřiceti dvou pacientů operovaných pro KRK metodou PCR a následně elektroforetickou analýzou DNA přístrojem Agilent 2100 Bioanalyzér. K MSI analýze byla použita DNA vyizolovaná Qiagen DNeasy kitem ze vzorků nádorové tkáně a buněk kostní dřeně téhož pacienta. Vyizolovaná DNA byla použita k amplifikaci mikrosatelitů uvedených v Bethesda panelu (Bat25, Bat26, D2S123, D5S346 a D17S250) metodou PCR. Produkty PCR reakce byly analyzovány mikrofluidní gelovou elektroforézou na DNA 1000 LabChipu přístrojem Agilent 2100 Bioanalyzér. MSI status byl plně hodnotitelný u šestnácti pacientů, přičemž MSI byla nalezena v šesti případech ? u čtyř pacientů byl nádor definován jako vysoce mikrosatelitně nestabilní

Abstract:

Hereditary non-polyposis colorectal cancer (HNPCC) is a hereditary disease caused by embryonic mismatch repair mutations (MMR) of genes (hmlh1, hmsh2, hmsh6 and hpms2) which under normal conditions repair mistakes made during DNA replication. Phenotypic manifestation of gene MMR is microsatellite instability (MSI) manifesting itself in various numbers of repetition in microsatellite loci between the DNA samples of tumorous tissue and the reference sample (e.g. bone marrow cells or blood) of the same patient. MSI is present in 90 % HNPCC and 10 to 15 % sporadic colorectal carcinoma (CRC). Patients with high microsatellite instability show more favourable prognosis in response to the therapy. Furthermore, they are better protected against metastasis formation of lymphatic nodes and surrounding organs. In the experimental part of this Bachelor thesis a retrospective MSI study was carried out. The experiment was performed on forty-two patients operated for CRC by PCR method followed by electrophoretic DNA analysis using Agilent 2100 Bioanalyzer. Isolated DNA (using Qiagen DNeasy kit) from tumorous tissue samples and bow marrow cells of the same patient was used for MSI analysis. Isolated DNA was applied for microsatellite amplification listed in Bethesda panel (Bat25, Bat26, D2S123, D5S346 and D17S250) by PCR method. Products of PCR reaction were analyzed by microfluidic gel electrophoresis on DNA 1000Lan Chip using Agilent 2100 Bioanalyzer

Klíčová slova

Kolorektální karcinom, hereditární nepolypózní kolorektální karcinom, mikrosatelitní nestabilita, polymerázová řetězová reakce

Keywords

Colorectal carcinoma, mikrosatellite instability, hereditary non-polyposis colorectal cancer, polymerase chain reaction

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 29. 7. 2009

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 26. 8. 2009
• Vedoucí: Josef Srovnal
• Oponent: Petr Džubák

Univerzita Palackého

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie