Funkční analýzy prognostických faktorů u pacientek s karcinomem prsu

Bc. Zuzana Ožanová

Diplomová práce

Functional analysis of prognostic factors in breast cancer patients

Anotace:

Karcinom prsu je považován za nádorové onemocnění s nejvyšší mortalitou u žen po celém světě. I přes výrazný pokrok v oblasti zobrazovacích metod, díky němuž jsou pacientky diagnostikovány v časném klinickém stádiu, stále mnoho žen umírá v důsledku nádorového onemocnění. Jednou z hlavních příčin je fakt, že řada pacientek je léčena více nebo méně, než je zapotřebí. V současné době neexistuje vhodné molekulárně-biologické vyšetření, které by umožnilo rozdělit pacientky v časných klinických stádiích do skupin dle rizika nádorového onemocnění a individualizovat tak jejich léčebný plán. Jako nadějný prognostický marker se jeví biomolekuly mikroRNA (miRNA). Tato diplomová práce pojednává o mikroRNA z hlediska jejich zapojení do patogeneze karcinomu prsu, jejich úlohy v diagnostice, prognóze a terapii karicnomu prsu. S využitím qRT-PCR byla provedena analýza exprese čtyř vybraných miRNA: miR-9, miR-34a, miR-128a, miR-210 u pacientek s karcinomem prsu. Exprese miRNA byla stanovena u pacientek, kde nastala recidiva do pěti let od stanovení diagnózy, ve srovnání s kontrolními vzorky, u kterých nádor nerecidivoval. U dvou ze čtyř miRNA: miR-128a a miR-210 byla identifikovaná signifikantně zvýšená hladina u pacientek s recidivou onemocnění. Součástí diplomové práce byly taktéž in vitro funkční analýzy u vybrané miR-210 provedené na triple-negativní buněčné linii MDA-MB-231, jejichž cílem bylo určit vliv miR-210 na migraci, proliferaci, buněčný cyklus a apoptózu. Po experimentálním snížení hladiny miR-210 byl pozorován vliv na migraci a proliferaci u buněčné linie MDA-MB-231. Výsledky studie ukázaly, že na základě exprese miR-128a a miR-210 je možné rozlišit pacientky, u kterých došlo k recidivě onemocnění od pacientek, jejichž karcinom nerecidivoval. In vitro funkční analýzy dále potvrdily vliv miR-210 na regulaci migrace a proliferace.

Abstract:

Breast carcinoma is considered a tumor disease with the highest mortality among women worldwide. Despite significant advances in imaging techniques resulting in more patients diagnosed at an early clinical stage, many women still die of cancer. One of the main reasons is the fact that many patients are treated either more, or less than is needed. There is currently no suitable molecular- biological testing, which would allow to divide patients in the early clinical stages into groups according to their risk of cancer and to individualize their treatment plan. As a promising prognostic marker currently appear to be biomolecules microRNA (miRNA). This thesis deals with the microRNA in terms of their involvement in the pathogenesis of breast carcinoma, their role in diagnosis, prognosis and therapy of breast cancer. By using qRT-PCR an expression of four selected miRNA was analyzed: miR-9, miR-34a, miR-128a, miR-210. The analysis was performed in patients with breast cancer, where a relapse within five years of diagnosis appeared compared to patients where the tumor did not relapse. In two of the four miRNAs: miR-128a and miR-210, the level of expression was significantly elevated in patients with the relapsed disease. In vitro functional analysis in selected miR 210 carried on triple-negative cell line MDA-MB-231 were also part of this thesis. Their purpose was to determine an effect of miR-210 in migration, proliferation, cell cycle and apoptosis. After the experimental reduction of the level of miR-210, the significant effect on migration and proliferation of cell line MDA-MB-231 was observed. The results of the study showed that based on the expression of miR-128a and miR-210 it is possible to distinguish patients whose disease relapsed from patients with non-relapsed tumor. In vitro functional analysis also confirmed the effect of the biomolecule miR-210 on regulation of the migration and proliferation.

Klíčová slova

Karcinom prsu, prognóza, relaps, biomarker, mikroRNA (miRNA), časné klinické stádium, breast cancer, prognosis, relapse, microRNA (miRNA), early clinical stage

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 18. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 6. 2015
• Vedoucí: doc. RNDr. Ondřej Slabý, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie