Význam molekulárně cytogenetického vyšetření u B-nehodgkinských lymfomů

Bc. Barbora ČUDOVÁ

Master's thesis

Importance of molecular cytogenetics investigation in B-cell Non-Hodgkin lymphoma

Abstract:

Tato diplomová práce se zabývá B-nehodgkinským lymfomem (B-NHL) a molekulárně cytogenetickými změnami, které jej doprovázejí a mají diagnostický a prognostický význam. Patří mezi ně zejména přestavby kandidátních genů MYC, BCL2 a BCL6, ale i další aberace. Nejvhodnějším způsobem jejich detekce je cytogenetické a molekulárně cytogenetické vyšetření nativního nádorového materiálu, ten je však u většiny pacientů obtížné získat. Proto se vyšetření nejčastěji provádí metodou fluorescenční in situ hybridizace (FISH) na parafínových (FFPE) řezech nádorových tkání odebraných pro histologické vyšetření. V období od října 2018 do března 2020 bylo celkem vyšetřeno 43 pacientů s B-NHL, u kterých bylo třeba upřesnit diagnózu a stanovit subtyp onemocnění. Dalších 23 pacientů bylo vyšetřeno retrospektivně ve spolupráci s Ústavem klinické a molekulární patologie. Tento soubor pacientů byl sestaven na základě morfologického a histologického nálezu high-grade B-buněčného lymfomu, u kterého bylo podezření na diagnózu double/triple hit lymfomu (DHL/THL). U všech pacientů byla provedena FISH na FFPE řezech s komerčně dostupnými genovými sondami. Pokud byl k dispozici nativní nádorový materiál, bylo provedeno klasické cytogenetické vyšetření metodou FISH, případně mFISH, (mnohobarevná FISH) na kultivovaných buňkách. Z prvního souboru 43 pacientů bylo úspěšně vyšetřeno 34 pacientů, z toho u 30 byly nalezeny různé chromozomové aberace, které byly zahrnuty do klinického hodnocení a napomohly k přesnějšímu stanovení diagnózy a léčebného postupu. Z 23 retrospektivně vyšetřených pacientů s podezřením na high-grade B-lymfom, bylo úspěšně vyšetřeno 14 pacientů. Jedna pacientka byla na základě prokázané přestavby genů MYC a BCL6 zařazena do nově vzniklé kategorie DHL.

Abstract:

This master thesis is focused on B-nonhodgkin lymphoma (B-NHL) and accompanying molecular cytogenetic changes, which have diagnostic and prognostic significance. These include, in particular, rearrangements of the candidate genes MYC, BCL2 and BCL6, but also other aberrations. The best way to detect these aberrations is to perform cytogenetic and molecular cytogenetic examination of native tumor material. Unfortunately, it is difficult to obtain suitable material in most patients. Therefore the examination is most often performed by fluorescence in situ hybridization (FISH) on formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissue taken for histological examination. A total of 43 patients with B-NHL were examined from October 2018 to March 2020, in whom the diagnosis had to be clarified and the disease subtype specified. Another cohort of 23 patients was examined retrospectively in collaboration with the Institute of Clinical and Molecular Pathology. These patients were selected based on morphological and histological findings of high-grade B-cell lymphoma, in which a diagnosis of double/triple hit lymphoma (DHL/THL) was suspected. All of them were investigated by FISH on FFPE tissues with the commercially available probes. If native tumor material was available, classical cytogenetic examination supplemented with FISH or mFISH (multicolor FISH) was performed on cultured cells. Thirty-four patients out of 43 patients of the first group, were successfully examined. Various chromosomal aberrations were found in 30 of them. Results were included in the clinical decision making and contributed to specify the diagnosis and to determine appropriate treatment strategy. Fourteen patients out of 23 retrospectively examined patients with suspected high-grade B-lymphoma,were successfully tested. One patient was included in the newly formed DHL category based on a rearrangement of the MYC and BCL6 genes.

Keywords

B-nehodgkinský lymfom (B-NHL), difuzní velkobuněčný lymfom (DLBCL), formalin fixed paraffin embedded (FFPE) řez, fluorescenční in situ hybridizace (FISH)

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 25. 5. 2020

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Helena Urbánková, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology