Příprava rekombinantního enzymu metabolismu sacharidů v sóji

Petr PLEVÁK

Bachelor's thesis

Preparation of the recombinant enzyme involved in carbohydrates metabolism of soybeans

Anotácia:

Alfa-galaktosidasy jsou enzymy katalyzující hydrolýzu galaktosových reziduí v oligosacharidech a polymerních galaktomananech, přičemž se liší svou substrátovou preferencí. V minulosti se alfa-galaktosidasy získávaly výhradně izolací z mikroorganismů, kdežto dnes jsou již díky metodám molekulární biologie připravovány rekombinantně v různých expresních systémech. Experimentální část byla zaměřena na přípravu dvou konstruktů pPICZA::MelA a pGAPZA::MelA vhodných pro expresi v kvasinkách. Pro jejich získání byly použity metody molekulárni biologie jako je transformace, izolace DNA, restrikce, ligace či PCR. Na závěr byly optimalizovány podmínky exprese rekombinantní alfa-galaktosidasy, přičemž její přítomnost v různých typech médií byla detekována pomocí SDS-PAGE nebo spektrofotometrickým měřením enzymatické aktivity.

Abstract:

Alpha-galactosidases are enzymes that catalyze the hydrolysis of galactose residues in oligosaccharides and polymer galactomannans. They differ in substrate specificity. In the past, alpha-galactosidases were obtained just through isolation from microorganisms but nowadays they can be prepared recombinantly in various expression systems by the use of molecular biology methods. The experimental part is focuse on preparation of two different constructs pPICZA::MelA and pGAPZA::MelA, which are suitable for expression in yeasts. They were prepared by the use of molecular biology methods such as transformation, DNA isolation, restriction, ligation and PCR. Finally, the expression conditions of recombinant alpha-galactosidase were optimized. The production of enzyme was monitored by SDS-PAGE in different media types or by spectrophotometric measurement of enzymatic activity.

Kľúčové slová

Metabolismus sacharidů, sója, alfa-galaktosidasa, P. pastoris X-33, klonování, exprese proteinu.

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2016

Zverejniť od: 11. 5. 2016

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: RNDr. Lenka Dzurová, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biology / Molecular and Cell Biology