Exprese a strukturní studie rekombinantního LTP2 z ječmene

Bc. Kateřina Sikorová

Master's thesis

Expression and structural study of recombinant barley LTP2

Anotácia:

Cílem diplomové práce bylo vyvinout postup exprese rekombinantního proteinu "non-specific lipid transfer protein 2" z ječmene pro strukturní studie a další aplikace. Expresní vektor byl zkonstruován naklonováním komerčně získaného syntetického genu, amplifikovaného polymerasovou řetězovou reakcí, do plasmidu pET-19b. Exprese v Escherichia coli byla optimalizována pro bohatá i minimální media. Minimální medium M9 bylo použito k produkci isotopy značeného proteinu pro NMR studie. Protein byl purifikován a zkontrolován NMR spektroskopií. NMR spektrum ukázalo, že protein je dobře poskládán a počet signálů odpovídal sekvenci proteinu. Protein byl dále upraven bodovou mutagenezí, pomocí které byla provedena inserce dvou N-terminálních aminokyselin, o kterých bylo zjištěnou, že jsou součástí zralého proteinu izolovaného z přírodního zdroje.

Abstract:

Goal of the diploma thesis was to develop a protocol for expression of recombinant non-specific lipid transfer protein 2 from barley for structural studies and other applications. The expression vector was constructed by cloning a commercially obtained synthetic gene, amplified by polymerase chain reaction, into a pET-19b plasmid. Expression in Escherichia coli was optimized for rich and minimal media. The M9 minimal medium was used to produce isotope-labeled protein for NMR studies. The protein was purified and checked by NMR spectroscopy. The NMR spectrum showed that the protein is well folded and number of signals corresponded to the protein sequence. The protein was further modified by site-directed mutagenesis to insert two N-terminal amino acids, which were found to be part of the mature protein isolated from the natural source.

Keywords

non-specific lipid transfer protein 2, ns-LTP2, Hordeum vulgare, klonování, cloning, exprese, expression, NMR

Jazyk práce: English

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 16. 5. 2008

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 17. 6. 2008
• Vedúci: prof. Mgr. Lukáš Žídek, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry