Imunoblotová analýza a lokalizace fúzního proteinu fosfolipasa D alfa 1-YFP (PLDa1-YFP) v plda1-1 a plda1-2 mutantních rostlinách Arabidopsis thaliana

Pavel KRUPAŘ

Bachelor's thesis

Immunoblotting analysis and localization of Phospholipase D alpha 1 protein tagged with YFP (PLDa1-YFP) in plda1-1 and plda1-2 Arabidopsis thaliana mutant plants.

Abstract:

Fosfolipasy jsou enzymy, které hydrolyzují strukturní fosfolipidy - základní složky cytoplasmatické membrány buňky. Fosfolipasa D alfa 1 se prostřednictvím svého produktu kyseliny fosfatidové podílí na regulaci řady procesů, jako jsou růst a vývoj rostliny nebo reakce na abiotický i biotický stres. Předkládaná práce má za cíl imunoblotovou analýzou ověřit přítomnost fúzního proteinu PLDa1-YFP v plda1-1 a plda1-2 mutantních rostlinách Arabidopsis thaliana komplementovaných s proPLDa1::PLDa1:YFP konstruktem a následně tento protein lokalizovat v nadzemní i kořenové části komplementovaných rostlin pomocí konfokální laserové skenovací mikroskopie. Imunoblotová analýza ověřila přítomnost fúzního proteinu v komplementovaných rostlinách a mikroskopická analýza potvrdila zvýšenou přítomnost PLDa1-YFP proteinu v buňkách kořenové čepičky, ve špičkách kořenových vlásků, ve středním válci kořene a ve svěracích buňkách průduchů. Tím se dokázal značný podíl PLDa1 na regulaci vývojových procesů u Arabidopsis thaliana, jako vývoj kořenových vlásků, zakládání laterálního kořene nebo regulace otvírání a zavírání průduchů.

Abstract:

Phospholipases are enzymes which hydrolyse structural phospholipids -components of the cytoplasmic membrane. Plant phospholipase D alpha 1 is involved in the regulation of a variety of processes, such as plant growth and development or response to various biotic or abiotic stresses. This thesis aims to verify the presence of fusion protein PLDa1-YFP in plda1-1 and plda1-2 Arabidopsis thaliana mutant plants complemented with proPLDa1::PLDa1:YFP construct and to localize PLDa1-YFP protein in root, leaves and petiole using confocal laser scanning microscopy. In this thesis the presence of PLDa1 in transformed plants is confirmed and the functional role of this enzyme in the regulation of various plant developmental processes such as root hair formation and stomata dynamics is elucidated.

Keywords

fosfolipasa D, Arabidopsis thaliana, lokalizace, imunoblotová analýza, konfokální mikroskopie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 5. 2019

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Pavol Vadovič, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biotechnology and Gene Engineering