Analýza cytomegalovirové reaktivity efektorových gamma-delta buněk u zdravých jedinců

Bc. Petra Gallová

Diplomová práce

Analysis of cytomegalovirus reactivity of effector gamma-delta cells in healthy donors

Anotace:

Lidský cytomegalovirus (CMV) je jeden z nejrozšířenějších virů v lidské populaci, který po primární infekci přetrvává v podobě latentní infekce v organismu. Přestože u imunokompetentních jedinců probíhá infekce často asymptomaticky, u imunokompromitovaných jedinců může způsobit závažné, život ohrožující onemocnění. Mezi nejdůležitější efektorové buňky v anti-CMV reaktivitě patří CMV specifické αβ T-lymfocyty, nicméně v posledních letech bylo potvrzeno, že důležitou roli hrají také γδ T-lymfocyty. Cílem diplomové práce je vůbec poprvé provést paralelní analýzu zastoupení populací γδ T-lymfocytů a CD8+ CMV specifických αβ T-lymfocytů u CMV seropozitivních (CMV+) dárců s pěti nejčastěji se vyskytujícími HLA alelami (HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*24, HLA-B*07, HLA-B*35). Celkem bylo analyzováno 63 vzorků periferní krve (PK) od 26 zdravých jedinců s chronickou CMV infekcí a 18 CMV seronegativních jedinců pomocí pětibarevné průtokové cytometrie. U CMV+ dárců byl medián výskytu Vδ2+ buněk 2,5 %, Vδ2- buněk 1,8 %, zatímco medián frekvence specifických αβ T-buněk byl 0,19 % (HLA-A*02), 0,15 % (HLA-A*01), pro zbylé alely se četnosti pohybovaly v rozmezí 0,01 - 0,03 %. Rovněž bylo zjištěno, že četnosti ani jedné z těchto populací v PK se signifikantně nemění v průběhu chronické CMV infekce. U 6 dárců bylo také provedeno stanovení expresních profilů miRNA a bylo identifikováno 15 miRNA s odlišnou mírou exprese (p<0,0001) u populace Vδ2- T-lymfocytů a CD8+ CMV specifických αβ T-lymfocytů s restrikcí k alele HLA-A*02 a 10 miRNA s odlišnou expresí (p<0,05) u CMV specifických αβ T-lymfocytů s restrikcí k alele HLA-A*01. Mnohým ze zjištěných miRNA je přikládán význam v buněčné proliferaci, přežití, migraci a adhezi buněk a dá se tedy předpokládat, že tyto miRNA hrají roli rovněž v CMV reaktivitě těchto populací T-lymfocytů.

Abstract:

Human cytomegalovirus (CMV) is one of the most widespread viruses in human population, which after the primary infection persists lifelong in the body. Although infections are often asymptomatic in most immunocompetent individuals, CMV reactivation in immunocompromised patients can lead to serious life-threatening disease. The most important effector cells in the anti-CMV reactivity are CMV specific αβ T cells, but in recent years it has been confirmed that γδ T cells also play an important role. The aim of this thesis was to perform the first ever parallel comparative analysis of the frequencies of γδ T cells populations and CD8+ CMV-specific αβ T-lymphocytes in CMV seropositive (CMV+) donors with the five most commonly occurring HLA alleles (HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*24, HLA-B*07, HLA-B*35). A total of 63 peripheral blood samples were analysed from 26 healthy individuals with chronic CMV infection and 18 CMV seronegative individuals by multicolour flow cytometry. In CMV+ donors, the median levels of Vδ2+ and Vδ2- cells were 2,5 % and 1,8 % of CD3+ T cells, respectively, while the median frequencies of specific αβ T cells were 0.19 % (HLA-A*02), 0.15 % (HLA-A*01), and the remaining allele frequencies ranged from 0.01 to 0.03 %. It was also confirmed that neither of the populations’ frequencies in peripheral blood significantly changes during chronic CMV infections in this cohort. In addition, the miRNA expression profiles were generated in 6 healthy donors. A total of 15 miRNAs have been identified in three donors within their populations of Vδ2- T cells and CD8+ CMV-specific αβ T cells restricted to HLA-A*02 allele with different levels of expression (p <0.0001). Next, 10 miRNAs have been determined in three donors within Vδ2- T cells and CMV specific αβ T cells with restriction to HLA-A*01 allele (p <0.05). Many of the identified miRNA are important in cell proliferation, survival, migration and adhesion, and it is therefore assumed that these miRNAs also play a role in CMV reactivity in both populations of T-lymphocytes.

Klíčová slova

Cytomegalovirus, CMV, gamma delta T-lymfocyty, anti-CMV reaktivita, CMV specifické CD8+ alfa beta T-lymfocyty, miRNA, gamma delta T-lymfocytes, anti-CMV reactivity, CMV-specific CD8+ alpha-beta T-lymfocytes

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2015
• Vedoucí: Mgr. Andrea Knight, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie / Molekulární biologie a genetika