Zavedení CRISPR metody u modelového organizmu Huseníčku rolního (Arabidopsis thaliana)

Matej Šamaj

Bakalářská práce

Introduction of the CRISPR method in the model organism Arabidopsis thaliana

Anotace:

CRISPR/Cas systémy představují důležitý mechanismus molekulárních nůžek, kterým se prokaryotické organizmy mohou bránit vůči virovým patogenům. Vzhledem na jeho schopnost velmi přesného zacílení na vybraná místa v genomu se tento mechanismus velmi rychle prakticky uplatnil při genové editaci a mutacích u různých druhů organizmů včetně živočichů a rostlin. Záměrem této bakalářské práce bylo navrhnout a připravit CRISPR/Cas9 konstrukty na vyřazení genů CYP98A3 a PDS1 pomocí dvou typů klonovaní. Tyto konstrukty byly zaklonovány do vhodných vektorů a přeneseny do bakterií Escherichia coli a Agrobacterium tumefaciens. Transgenní rostliny Arabidopsis thaliana byly připraveny pomocí stabilní transformace Agrobacteriem a poté úspěšně vyselektovány na mediích obsahujících herbicid fosfinotricin.

Abstract:

CRISPR/Cas systems represent an important mechanism of molecular scissors, by which bacteria can defend themselves against viral pathogens. This mechanism, due to its very precise targeting of selected sites in the genome, was very quickly practically applied in gene editing and mutations in various species of organisms, including animals and plants. The aim of this bachelor thesis was to design and prepare constructs for CRISPR/Cas9 to knockout CYP98A3 and PDS1 genes using two types of cloning. These constructs were cloned into appropriate vectors and transfected into Escherichia coli and Agrobacterium tumefaciens. Transgenic plants of Arabidopsis thaliana were prepared by stable Agrobacterium transformation, and then successfully selected on media containing the herbicide phosphinothricin.

Klíčová slova

Gateway, editace genů, Arabidopsis thaliana, CRISPR/Cas9, molekulární klonování

Keywords

CRISPR/Cas9, molecular cloning, Gateway, gene editing, Arabidopsis thaliana

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2021

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Dalibor Húska, Ph.D.

Mendelova univerzita v Brně

Agronomická fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Agrobiologie / Molekulární biologie a biotechnologie