Optimalizace metody pro izolaci DNA z fermentovaných masných výrobků

Lukáš Bednář

Bachelor's thesis

Optimalization of the Metods For Isolation of DNA From Sausages

Abstract:

Tato bakalářská práce je zaměřena na izolaci mikrobiální DNA z fermentovaných masných výrobků. Teoretická část se zabývá charakteristikou fermentovaných masných výrobků, technologií výroby, mikrobiální diverzitou a non-kultivačními metodami. V praktické části této práce byla největší pozornost věnována optimalizaci izolace mikrobi-ální DNA za použití 3 metod modifikace bez aplikace látek usnadňujících izolaci DNA, s přídavkem chloroformu, s přídavkem SDS. Dále byla provedena amplifikace izolované DNA pomocí metody PCR a následná kontrola pomocí elektroforetické soustavy. Pro sta-novení mikrobiální diverzity bylo využito metody DGGE s použitím dvou gradientů dena-turačních činidel (40/60 % a 30/70 %). Pozitivních výsledků bylo dosaženo při použití gra-dientu denaturačních činidel 30/70 %, pomocí kterého bylo stanovena větší diverzita mi-kroorganismů vyskytujících se ve fermentovaném masném výrobku Paprikáš.

Abstract:

This bachelor thesis is focused on isolation of the microbial DNA from sausages. The theo-retical part deals with the characteristic of sausages, manufacturing technology, microbial diversity and molecular biology methods. The biggest part of the practical part of this thesis has been paid to the optimisation of DNA isolation. For this purpose three modification methods were developed without addition of compounds facilitating DNA isolation, with addition of chloroform, with addi-tion of SDS. Next step was amplification of isolated DNA by PCR and examination of PCR products by gel electrophoresis. DGGE method was used for the purpose of determi-nation microbial diversity. Gradients of denaturants used in this work were 40/60% and 30/70%. Positive results were achieved by use 30/70 % gradient of denaturants.

Keywords

Fermentované masné výrobky, izolace DNA, PCR, DGGE

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 4. 5. 2017

Thesis defence

Tomas Bata University in Zlín

Faculty of Technology

Bachelor programme / field:
Chemistry and Food Technologies / Chemistry and Food Technologies