Dynamika transkripčních faktorů rodiny p53 a STAT3 v nádorových buněčných liniích

Bc. Radovan Krejčíř

Diplomová práce

Molecular dynamics of p53 family and STAT3 transcription factors in cancer cell lines

Anotace:

Rodina proteinů p53 zahrnuje tři homologní proteiny, které patří mezi transkripční faktory a které se uplatňují při řízení řady buněčných procesů v lidském organismu. Nejlépe prostudovaný je protein p53, který je klíčovým nádorovým supresorem. Tato práce se věnuje regulačním mechanismům, pomocí kterých protein p53 ovlivňuje expresi zbylých dvou členů proteinové rodiny - proteinů p63 a p73. V práci je dále věnována pozornost transkripčnímu faktoru STAT3. Ten patří naopak mezi protoonkogeny a je jednou z nejčastěji deregulovaných molekul v nádorových onemocněních. Základem pro experimentální práci byly buněčné linie lišící se variantou proteinu p53. Po navození stresových podmínek prostřednictvím ošetření buněk cytostatiky byl sledován rozdíl mezi buněčnými liniemi v ovlivnění exprese genů rodiny p53 a STAT3. Exprese těchto genů byla stanovována metodami kvantitativní polymerázové řetězové reakce a westernového přenosu. Konfokální mikroskopie byla využita pro lokalizaci proteinů zájmu v buňce.

Abstract:

Three homologous transcription factors form the p53 protein family. These proteins contribute to regulation of many cellular processes in human body. Protein p53 is the best characterized member of the family and a key tumor suppressor protein. This work is focused on regulatory mechanisms employed by p53 protein to affect gene expression of other members of the family - proteins p63 and p73. Another subject of this thesis is a transcription factor STAT3. STAT3 is a proto-oncogene and one of the most frequently deregulated molecules in cancer. Experimental work was based on a set of cancer cell lines expressing different variants of p53 protein. Cells were exposed to stress conditions induced by cytostatics and differences in gene expression were analyzed. Quantitative polymerase chain reaction and western blotting were applied to measure expression of TP53, TP63, TP73 and STAT3 genes on mRNA and protein level and confocal microscopy was used to localize proteins in cells.

Klíčová slova

proteinová rodina p53, STAT3, mutace, regulace, buněčné linie p53 protein family, mutations, regulation, cell lines

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 10. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 8. 6. 2017
• Vedoucí: doc. Mgr. Václav Brázda, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie / Molekulární biologie a genetika