Význam gonozomálního mozaicismu v etiologii ženské neplodnosti

Radka Chytilíková

Master's thesis

Significance of gonosomal mosaicism in etiology of female infertility

Abstract:

GM (gonozomální mozaicismus) je nejčastější chromozomální aberací u žen léčených pro poruchy reprodukce. Tato aberace se však vyskytuje také u zdravé populace. Z tohoto důvodu nebyla dosud prokázaná souvislost mezi minoritním mozaicismem chromozomu X a neplodností. Pro chromozomální analýzu se nejčastěji využívají kultivované lymfocyty. Tato metodika má však svoje omezení, a to limitovaný počet analyzovaných buněk, množství artefaktů způsobených kultivací in vitro. Použití dalších metod např. FISH (fluorescenční in situ hybridizace) umožňuje lepší porozumění těmto procesům. Metoda: Cytogenetická analýza byla provedena ve skupině neplodných žen (n = 70; průměrný věk 30; rozpětí 18-41 let) a v kontrolní skupině žen (n = 85; průměrný věk 32; rozpětí 23-46 let), které měly v anamnéze nejméně dvě spontánní těhotenství bez spontánního abortu. Metoda FISH byla použita při analýze kultivovaných lymfocytů u 65 žen testovaného souboru a u 46 žen kontrolního souboru a u nekultivovaných lymfocytů u 51 žen testovaného a u 41 žen kontrolního souboru. Pro statistické vyhodnocení byly využity T test a Mann-Whitney test. Výsledky: Počet cytogeneticky detekovaných případů GM se signifikantně neliší mezi testovanou (18,77 %) a kontrolní (14,11 %) skupinou (?2(1) = 0,056288). Frekvence buněk s aneuploidií X, která byla detekovaná metodou FISH, byla signifikantně vyšší v testované než v kontrolní skupině ve vzorcích kultivovaných (p = 0,001233) i nekultivovaných lymfocytů (p = 0,00000). V testované skupině bylo prokázáno, že buňky s aneuploidií X se vyskytovaly častěji ve vzorcích s nekultivovanými než kultivovanými lymfocyty (p = 0,000139). Testy v kontrolní skupině tyto výsledky neprokázaly (p > 0,05). Závěr: Metodou FISH bylo potvrzeno, že GM se vyskytuje častěji v populaci neplodných žen. Dosud nebylo prokázáno, zda je GM konstituční aberace nebo změna vyvolaná in vivo. I-FISH na nekultivovaných lymfocytech je metoda, která umožňuje objektivnější zhodnocení aberantních buněk, vzhledem k tomu, že eliminuje artefakty způsobené kultivací in vitro

Abstract:

LLGM (low level gonosomal mosaicism) is the most prevalent chromosomal aberration in the population of females treated for reproductive impairment. Association of this minority mosaicism with infertility has not been proved yet, because the same aberration is also detectable in healthy population. As the most frequently used chromosomal analysis of cultured lymphocytes has several inherent limitations, such as the number of cells examined and artefacts caused by in vitro culture conditions, employment of additional methods provides more complex insight into this problem. Method: Cytogenetic analysis was performed in a group of females (n = 70; mean age 30; range 18?41) treated for infertility and in the control group women (n = 85; mean age 32; range 23?46) with at least two spontaneous conceptions without a history of miscarriage. FISH was performed on cultured lymphocytes in 65 and 46 cases respective and on uncultured lymphocytes in 51 and 41 cases. T and Mann-Whitney tests were used for statistical analysis. Results: Number of cytogenetically detected mosaic cases did not significantly differ between tested group ? 18,57 % and control ? 14,11 % (?2(1) = 0,056288). Frequency of cells with aneuploidy X detected by FISH was significantly higher in the tested than in the control group in samples of cultured lymphocytes (p = 0,001233) and also in samples of uncultured lymphocytes (p = 0,00000). X-aneuploidy cells were more abundant in uncultured than in cultured lymphocytes in the tested group (p = 0,000139) but not in the control group (p > 0,05). Conclusion: LLGM is more frequent in a population of infertile females when examined by FISH. Whether LLGM is a constitutional aberration or change gained as a consequence of physical condition of an individual is unclear. I-FISH on uncultured lymphocytes is recommended as a more reliable method, as it avoids artificial changes caused by in vitro conditions

Keywords

neplodnost, chromozomální aberace, gonozomální mozaicismus, fluorescenční in situ hybridizace, cytogenetické vyšetření

Keywords

infertility, chromosome aberrations, sex chromosome mosaicism, fluorescent in situ hybridization, cytogenetics

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 12. 5. 2009

Thesis defence

• Date of defence: 10. 6. 2009
• Supervisor: Pavlína Čapková
• Reader: Kateřina Adamová

Univerzita Palackého

Přírodovědecká fakulta

Master programme / field:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie