Sledování genomové stability lidských indukovaných pluripotentních kmenových buněk

Bc. Daniela Řeháková

Diplomová práce

Monitoring genomic stability of human induced pluripotent stem cells

Anotace:

Lidské indukované pluripotentní kmenové buňky (hiPSCs) mohou být v laboratoři vytvořeny z buněk tkání dospělého jedince. Zároveň mohou být diferencovány do zvoleného buněčného typu. Díky tomu mají velký potenciál pro využití ve výzkumu i v klinické praxi. Pro jejich využití je ovšem důležité, aby byla zachována integrita jejich genomu. Během kultivace může docházet k poškození DNA a pokud není jeho oprava dostatečná, může dojít ke změně vlastností kultury. Dvouřetězcové zlomy jsou jedním z možných poškození, a bez řádné opravy mohou vést i k velkým genomovým přestavbám a tím k chromozomálním aberacím. Tato práce se proto zabývá opravou dvouřetězcových zlomů, a to imunocytochemickým sledováním markerů γH2AX a 53BP1 s ohledem na fázi buněčného cyklu. Pro analýzu jsou použity tři hiPSCs a jedna hESCs linie v nízkých a vysokých pasážích a linie hDFs. Sledováno je spontánní poškození DNA a odpověď buněk na ozáření ionizujícím zářením v několika časových bodech.

Abstract:

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) can be induced from tissues of an adult. They can also be differentiated into chosen cell type. Therefore, they possess great potential for application in both scientific research and medicine. To be used, it is of utmost importance for them to maintain their genomic integrity. DNA damage can occur during cultivation, and if not repaired correctly, culture quality can be disrupted. Double strand breaks present a type of DNA damage that can lead to DNA rearrangements and subsequently to chromosomal aberrations. That is why this thesis focuses on the repair of double strand breaks. Two markers, proteins γH2AX and 53BP1, are analyzed by immunocytochemistry. DNA damage is studied in regard with cell cycle stage. Three hiPSCs lines and one hESCs line are used in low and high passage. One cell line of hDFs is also analyzed. Spontaneous damage and reaction to ionizing radiations in time are studied.

Klíčová slova

hiPSCs, kmenové buňky, dvouřetězcové zlomy, γH2AX, 53BP1, dlouhodobá kultivace, stem cells, double-strand breaks, long-term cultivation

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 19. 6. 2017
• Vedoucí: Mgr. Pavel Šimara, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Lékařská genetika a molekulární diagnostika pro odborné pracovníky v laboratorních metodách