Genotoxické hodnocení kontaminovaných vzorků povrchových vod pomocí Amesova fluktuačního testu

Mgr. Zuzana JASKÓOVÁ

Bachelor's thesis

GENOTOXICITY ASSESSMENT OF CONTAMINATED SURFACE WATER SAMPLES BY THE AMES FLUCTUATION ASSAY

Abstract:

Bakalářská práce se ve své teoretické části zaměřuje na vliv a účinky xenobiotik v povrchových vodách a detekční systémy využívané ke stanovení a hodnocení genotoxicity. Hlavním cílem praktické části bylo zvládnutí metodiky Amesova miniaturizovaného fluktuačního testu v podmínkách ekotoxikologické laboratoře Katedry biologie a ekologie Ostravské univerzity v Ostravě, její ověření na standardních látkách a aplikace testu na hodnocení reálných vzorků vod (povrchová a pitná voda). Pro testování byly použity mutantní kmeny bakterie Salmonella typhimurium (TA98 a TA100). Kmen TA98 detekuje přítomnost látek vyvolávajících posunové a TA100 záměnové mutace. Ke stanovení přítomnosti přímých mutagenů ve vzorcích byla provedena varianta testu bez metabolické aktivace. Modelování metabolické aktivity in vitro prostřednictvím krysího jaterního extraktu (tzv. S9 postmitochondriální frakce) bylo využito ve druhé variantě testu, testu s metabolickou aktivací, přičemž takto byly ve vzorcích detekovány nepřímé mutageny.

Abstract:

The bachelor thesis, especially in its theoretical part, focuses on an influence and effects of xenobiotics in surface water and detection systems used for genotoxicity assessment. Concerning the practical part of the thesis, the main aims were to master the miniaturized Ames fluctuation assay methodology in conditions of the ecotoxicological laboratory of the Department of Biology and Ecology of the University of Ostrava, to verify the propriety of the test procedure on standard mutagens and to apply the test to the evaluation of the real water samples (surface and potable water). The mutant Salmonella typhimurium strains (TA98, TA100) were used for the testing, whereas TA98 strain detects frame-shift mutations, TA100 strain base-paired ones. To demonstrate the presence of direct mutagens in the samples, a version of the test without metabolic activation has been carried out. In vitro metabolic activity simulation by means of rat-liver extract (so-called S9 post-mitochondrial liver fraction) has been employed in the other variant of the assay, the test with metabolic activation, which has been conducted for detection of indirect mutagens in the samples.

Keywords

Salmonella typhimurium (TA98 a TA100), Amesův miniaturizovaný fluktuační test genotoxicity, reálné vzorky vod (povrchová a pitná voda), standardní mutageny, krysí S9 frakce

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 24. 6. 2010

Accessible from:: 24. 6. 2010

Thesis defence

• Date of defence: 20. 8. 2010
• Supervisor: Mgr. Hana Sezimová, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biology / Systematic Biology and Ecology