Optimalizace přípravy rostlinných chromozomů pro zobrazování v SEM s vysokým rozlišením

Bc. Pavlína Kurková

Bachelor's thesis

Optimalization of plant chromosomes sample preparation for high-resolution SEM imaging

Anotácia:

Skenovací elektronová mikroskopie chromozomů má potenciál přispět k pochopení mechanismu sbalování DNA do chromozomu a mohla by také sloužit pro lokalizaci genů. K tomu je ale vzorek nezbytné připravit tak, aby bylo možné měřit data s co nejvyšší úrovní detailu. Tato bakalářská práce se věnuje optimalizaci přípravy rostlinných chromozomů pro zobrazování pomocí tohoto typu mikroskopie a určení vlivu jednotlivých kroků přípravy na výslednou kvalitu vzorku. Chromozomy byly získávány z meristemu kořenových špiček rostliny Trifolium pratense a následně podrobeny tradičnímu způsobu přípravy biologických vzorků pro skenovací elektronovou mikroskopii zahrnujícímu fixaci, kontrastování, dehydrataci a vysoušení. Kromě dehydratace a promývání byla činidla nanášena na sklíčko formou kapky o dostatečném objemu. Bylo ukázáno, že pomocí použitého postupu lze připravit vzorky rostlinných chromozomů pro účely skenovací elektronové mikroskopie s vysokým rozlišením.

Abstract:

Scanning electron microscopy has the potential to contribute to understanding of the mechanism of DNA folding into chromosome and it could also serve for gene localization. To achieve it, it is necessary to prepare the sample so that it is possible to measure data with the highest level of detail. This bachelor thesis deals with optimalization of the sample preparation for this type of microscopy and determination of the impact of individual preparation steps on the resulting sample quality. Chromosomes were obtained from root tip meristem of Trifolium pratense and then subjected to traditional way of biological sample preparation for scanning electron microscopy including fixation, staining, dehydration and drying. Except dehydration and rinsing, reagents were applied on the slides as a drop of sufficient volume. It was shown that it is possible to prepare samples of plant chromosomes for high resolution scanning electron microscopy with this type of preparation.

Kľúčové slová

chromozom, skenovací elektronová mikroskopie, mitóza, Trifolium pratense, chromosome, scanning electron microscopy, mitosis

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 4. 1. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 14. 2. 2018
• Vedúci: Mgr. Jiří Nováček, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Physics / Biophysics