Regulace aktivity proteinu p53 a p63 v lidské epidermis

Bc. Šárka URBANOVÁ

Master's thesis

The regulation of p53 and 63 protein activity in human epidermis

Abstract:

Na epidermis každodenně působí mnoho negativních vlivů, proto je chráněna různými mechanismy. Důležité jsou zejména procesy, které kontrolují buněčný cyklus, zabraňují abnormální proliferaci, přenosu poškozené DNA, podílí se na opravách poškozené DNA a podporují apoptosu. Mezi klíčové regulátory těchto procesů patří cykliny, cyklin dependentní proteinkinasy (Cdk) a nádorové supresory. Každá buňka prochází během svého života tzv. buněčným cyklem, který je kontrolován ve dvou bodech, tzv. ?check pointech?. Na správné funkci obou ?check pointů? se podílí proteiny rodiny p53 ? p53, p63 a p73, díky nimž nedochází k replikaci mutované DNA a k neregulovanému množení poškozených buněk. Z hlediska negativních vlivů, které na kůži působí, je nejvýznamnějším činitelem ultrafialové záření, jehož účinky jsou genotoxické. Díky slunečním paprskům, které UV záření obsahují, může dojít až k rozvoji zhoubných nádorů kůže. Z výsledků dosažených v této studii vyplývá, že UVB záření je zjevně škodlivé a že proteiny rodiny p53 jsou k němu různě citlivé. Největší citlivost vykazuje protein p63, jehož isoformy na ozáření UVB reagují odlišně. Cílem této práce bylo vyhodnotit změny v odebraných explantátech epidermis po ozáření UVB, zhotovit snímky vzorků po imunohistochemické reakci a zpracovat získaná pilotní data. Dalším úkolem bylo seznámit se se základními postupy imunohistochemie a optimalizovat protokol pro detekci p53, p63 a p73 v ozářené lidské epidermis. Tato práce se v teoretické části věnuje proteinům p53, p63 a p73, zejména funkci jejich isoforem v lidské kůži a vlivu UV záření na lidskou pokožku. V experimentální části je popsán postup imunohistochemické reakce pro detekci p53 a p63 v ozářené lidské epidermis.

Abstract:

Epidermis is exposed every day to many negative influences that is why it is protected by different mechanisms. The processes of a great importance are these which controll cell cycle, prevent abnormal proliferation, prevent transcribtion of damaged DNA, participate in the repairing damaged DNA and support apoptosis. Cyclin, cyclin-dependent proteinkinases and tumor supressors are the key regulators of these processes. During its life each cell goes through the cell cycle which is checked in two points - ?check points?. Proteins of a p53 family participate in correct function of this check points and prevent transcription of damaged DNA and unregulated proliferation of cells. One of the most important influences acting on the human skin is an ultraviolet radiation which is genotoxic. Sun rays including the UV radiation can cause a skin cancer. The UVB radiation is manifestly harmful and the proteins of the p53 family react to the UV radiation in different ways. The most sensitive is p63, its isoforms react variously. The main goal of the work was to analyse changes in the irradiated explantates, make photos of the samples and to compile the acquired pilot data. The next goal was to get insight to basic processes of imunohistochemistry and to optimise the protocol of the p53, the p63 and the p73 detection in the irradiated skin. The theoretic part of the work contains essay about the p53, the p63 and the the p73, especially the function of its isoforms in the human skin and the influence of the UV radiation on the human epidermis. The experimental part describes the process of imunohistochemistry for the p53 and the p63 detection in the irradiated human epidermis.

Keywords

p53, p63, UV záření, imunohistochemie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 4. 2011

Accessible from:: 10. 4. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 8. 6. 2011
• Supervisor: Prof. MUDr. Jiří Ehrmann, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Chemistry / Učitelství chemie pro střední školy - Učitelství biologie pro střední školy