Stanovení kyseliny lipoové v erytrocytech a její vliv na proliferaci buněk in vitro

Bc. Klára Pařízková

Master's thesis

Determination of lipoic acid in erythrocytes and its effect on cell proliferation in vitro

Abstract:

Kyselina lipoová je přírodně se vyskytující osmiuhlíkatá disulfidická sloučenina. Má dva optické izomery R--kyselinu lipoovou a S--kyselinu lipoovou. Jejich racemická směs se používá v terapii pacientů s diabetem. V poslední době se zkoumají také její protinádorové účinky. Optimalizovali jsme metodu vysokoúčinné kapalinové chromatografie s elektrochemickou detekcí ke stanovení kyseliny lipoové v erytrocytech. Stanovení kyseliny lipoové v erytrocytech má význam k získání poznatků o jejím transportu přes buněčnou membránu nebo o její kumulaci v erytrocytech při dlouhodobějším podávání. Stanovení může také přispět k řešení problematiky týkající se indukce apoptózy erytrocytů u pacientů suplementovaných kyselinou lipoovou. Pomocí systému xCELLigence a průtokové cytometrie bylo v naší práci zjištěno, že určité dávky kyseliny lipoové u buněčných linií karcinomu prsu snižují buněčnou proliferaci. U nádorové linie nemalobuněčného karcinomu plic způsobuje zástavu buněčného cyklu. Došli jsme k závěru, že využití kyseliny lipoové je v protinádorové terapii námi zkoumaných typů nádorů závislé na dávce. Může tak být využita spíše v nižších dávkách jako podpůrný prostředek, protože dávky vedoucí až k apoptóze jsou poměrně vysoké a mohou vést k poškození funkce ledvin.

Abstract:

Lipoic acid is a naturally occurring eight carbon disulfide compound. It has two optical isomers, R--lipoic acid and S--lipoic acid. Their mixture is used for therapy in patients with diabetes mellitus. Anticancer effects of lipoic acid also are explored recently. We have optimalized the method of high performance liquid chromatography with electrochemical detection for the determination of lipoic acid in erythrocytes. The determination of lipoic acid is important to gain knowledge about the transport through the erythrocyte membrane and its accumulation in erythrocytes during prolonged administration. This determination can also contribute to solving problems related to induction of apoptosis erythrocytes in patients supplemented with lipoic acid. Using xCELLigence system and flow cytometry we found out that specific dose of lipoic acid reduces proliferation of cells of breast carcinoma. Lipoic acid caused arrest of cell cycle in lung adenocarcinoma cell line. We can conclude, that lipoic acid anticancer use is a dose dependent. Lipoic acid in a low dosage can be use as a supporting agent only, becouse apoptotic dose is a high and can cause renal damage.

Keywords

Kyselina lipoová, cytotoxicita in vitro, erytrocyty, vysokoúčinná kapalinová chromatografie, xCELLigence

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 7. 5. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2015
• Supervisor: Mgr. Pavla Královcová, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Special Chemical and Biological Programmes / Bioanalyst