Studium vlivu inhibitorů ovlivňujících vývoj B lymfocytů na tvorbu galaktosa-deficientního IgA u IgA nefropatie

Bc. Helena ŽENOŽIČKOVÁ

Master's thesis

The study of the effect of inhibitors on the development of B lymphocytes on the formation of galactose-deficient IgA in IgA nephropathy

Abstract:

Diplomová práce pojednává o problematice IgA nefropatie, jakožto vážného onemocnění vedoucího k náhodnému nálezu hematurie a v horších případech i k selhání ledvin. Na tento typ onemocnění doposud nebyl vyvinut lék, jsou pouze dostupné metody léčby zpomalující progresivitu nemoci. V rámci diplomové práce byly rozebírány nejnovější poznatky související s projevy IgA nefropatie na imunologické a biochemické úrovni, zejména pokud se jedná o způsob N-glykosylace proteinů ve vztahu k tvorbě aberantně glykosylovaných forem IgA1. Rovněž je rozebrán způsob diferenciace B lymfocytů v lidské krvi se zapojením APRIL, BAFF, BCMA a TACI molekul. Praktická část byla zaměřena na analýzu B buněčných populací v periferní krvi s použitím povrchového barvení za použití metody spektrální cytometrie. Cílem bylo studium vlivu koncentrací IL-6 a jeho inhibitorů Stattic a AZD 1480 na Gd-IgA1 u pacientů s IgAN léčených a neléčených kortikosteroidy. Z výsledků bylo zjištěno, že účinkem IL-6 se snižuje populace CD19+ a sIgA+ B lymfocytů, zvyšuje se zastoupení Gd-IgA1 B lymfocytů a došlo k vyšší expresi molekul CD19+ lymfocytů na povrchu buněk u léčených pacientů. Kortikosteroidy jsou tedy díky svému pleiotropnímu efektu schopny tlumit jiné vedlejší příznaky nemoci než je právě exprese Gd-IgA1 B lymfocytů. Inhibitor Stattic neinhiboval CD19+ buňky, ale sIgA+ buňky z CD19+ lymfocytů, což se projevilo jako snížení procentuálního zastoupení Gd-IgA1 B lymfocytů, proto se nedaly změřit v porovnání s inhibitorem AZD 1480, který bylo možné analyzovat ve všech zkoumaných populacích B lymfocytů. Získané informace mohou být použity ke studiu způsobů, jak je možné ovlivnit tvorbu Gd-IgA1 pomocí inhibitorů JAK/STAT signálních drah nebo molekul ovlivňujících správný vývoj B lymfocytů.

Abstract:

The diploma thesis deals with the issue of IgA nephropathy, as a serious disease leading to accidental findings of hematuria and in worse cases to renal failure. A cure for this type of disease has not been developed yet. Treatment available at the moment can only slow down the progressivity of the disease. In the diploma thesis we analyzed the latest findings related to the manifestations of IgA nephropathy at the immunological and biochemical level, which can be caused by the differences of N-glycosylation of proteins and formation of aberrant glycosylated forms of IgA1. Differentiation of B lymphocytes in human blood with the involvement of APRIL, BAFF, BCMA and TACI molecules was also discussed. The experimental work focused on the analysis of B cell populations in peripheral blood by surface staining using the method of spectral cytometry. The aim of this work is to study the effect of IL-6 concentrations and its Stattic and AZD 1480 inhibitors on Gd-IgA1 in IgAN patients treated and untreated with corticosteroids. The results showed that the effect of IL-6 reduces the population of CD19+ and sIgA+ B lymphocytes, increases the representation of Gd-IgA1 B lymphocytes and there was a higher expression of CD19+ lymphocyte molecules on the cell surface of treated patients. Thanks to their pleiotropic effect, corticosteroids are able to decrease other side effects of the disease than the expression of Gd-IgA1 B lymphocytes. The Stattic inhibitor did not inhibit CD19+ cells, but sIgA+ cells from CD19+ lymphocytes, which manifested itself as a decrease in the percentage of Gd-IgA1 B lymphocytes, therefore they could not be measured as compared with the AZD 1480 inhibitor, which could be analyzed in all B cell populations mentioned in this work. The acquired information can be used to study the ways in which the production of Gd-IgA1 can be influenced by JAK/STAT signaling pathway inhibitors or molecules influencing the differentiation of B lymphocytes.

Keywords

IgA, nefropatie, aberantní IgA, N-glykosylace, průtoková cytometrie, B lymfocyty, IL-6, JAK/STAT signální dráhy, AZD 1480, Stattic inhibitory

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 26. 4. 2022

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Kateřina Zachová, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry