Konstrukce chemicky modifikovaných nukleových kyselin pro využití v elektrochemických DNA senzorech

Mgr. Medard Plucnara, Ph.D.

Disertační práce

Construction of chemically modified nucleic acids for application in electrochemical DNA sensors

Anotace:

Zavádění elektroaktivních sloučenin pro značení nukleových kyselin podstatně zvýšilo potenciál elektrochemie pro jejich analýzu. Díky možnosti naznačit pouze specifické řetězce (sondy) nebo jednotlivé monomerní složky a následně je enzymaticky inkorporovat do řetězce, případně značit selektivně jedno- nebo dvouřetězcovou DNA bylo možné vyvinout senzory pro detekci hybridizace s cílovou sekvencí, jednonukleotidových polymorfizmů, poškození DNA, mapování nukleotidové sekvence, atd. V předložené práci jsou popsány nové způsoby konstrukce řetězců pro zavedení redoxní modifikace do jediného konkrétního místa uvnitř řetězce, resp. pro charakterizaci nukleotidové sekvence pomocí kombinace redoxních značek. Dále jsou pak uvedeny dvě nové aplikace techniky značení DNA enzymem generujícím elektrochemicky detekovatelné produkty.

Abstract:

Introducing of electroactive compounds for labeling of nucleic acids significantly increased potential of electrochemistry for their analysis. Due to possibility to label only specific strands (probes) or particular monomeric components with their subsequent incorporation into DNA strand, and eventually possibility to label selectively single stranded or double stranded DNA it has been enabled to construct sensors for detection of hybridization with target sequence, single nucleotide polymorphisms, DNA damage, mapping of nucleotide sequence, etc. In this work new ways of construction of strands for introducing redox modification into single particular site inside of strand, respectively for characterization of nucleotide sequence utilizing combination of redox labels, are described. Furthermore, two new applications of technique of labeling of DNA by enzyme generating electrochemically detectable products are presented.

Klíčová slova

Enzymatické značení DNA, redoxní značení DNA, prodlužování primeru („PEx“ reakce), terminální deoynukleotidyl-transferáza, polymerázová řetězová reakce, voltametrie, SNP, multipotenciálové kódování, monoinkorporace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 7. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 12. 10. 2018
• Vedoucí: doc. RNDr. Miroslav Fojta, CSc.
• Oponent: doc. Dr. Ing. Tomáš Navrátil, doc. Ing. Renáta Šelešovská, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Doktorský studijní program / obor:
Biologie (čtyřleté) / Molekulární a buněčná biologie