Analýza molekulárních markerů lymfoproliferativních onemocnění

Aleš Efenberk

Diplomová práce

Analysis of molecular markers of lymphoproliferative diseases

Anotace:

V oblasti klinické praxe se v současné době objevují nové přístupy a metody, které se zabývají analýzou zbytnělých lymfatických tkání či analýzou lymfocytárních populací v periferní krvi. Tyto techniky jsou založené na principu polymerázové řetězové reakce využívající různých primerů. Primery jsou nejčastěji připravené tak, že rozpoznávají určité úseky na DNA, kódující řetězce B-lymfocytárního či T lymfocytárního buněčného receptoru. Díky tomu jsou schopné rozpoznat monoklonální zmnožení lymfocytárních populací, které je ve většině případů důsledkem rakovinného zmnožení. Tyto výsledky mohou poté pomoci lékařům při určení správné diagnózy. Předložená diplomová práce se zabývá analýzou těžkých řetezců B-lymfocytárních buněčných receptorů za pomoci PCR. Primery používané při této metodě rozpoznávají sekvenci na DNA kódující variabilní část těžkého řetězce. Po počáteční optimalizaci bylo analyzováno 32 kontrolních vzorků, u kterých byla předem známa diagnóza. Deset z nich bylo určeno jako pozitivní na nádorové lymfoproliferativní onemocnění a zbylých 22 bylo určeno od patologů jako lymfoproliferace nenádorového charakteru. Této diagnóze odpovídal výsledek analýzy v 28 případech. Pouze ve 4 případech byly výsledky analýzy odlišné od očekávaných výsledků. Na základě toho byla stanovena detekční míra metody na 87%

Abstract:

In the area of clinical investigation at present, there are new approaches and methods dealing with an analysis of hypertrophic lymphatic tissues or analysis of lymphocyte populations in peripheral blood. These techniques are based on a polymerase chain reaction using different primers. Primers are usually prepared to recognize specific segments of DNA encoding B- or T cell receptor chains. For this reason they are able to identify monoclonal lymphocyte populations, which are in most cases caused by cancer multiplication. These results then can help pathologists in determining the correct diagnosis. This diploma thesis deals with the analysis of B-cell receptor heavy chain using PCR. Primers which are used in this method are recognizing a sequence of DNA encoding the variable part of heavy chain. After the initial optimization, 32 control samples, which had been previously unambiguously diagnosed, were analyzed. Ten of them were identified as positive for malignant lymphoproliferative disease, and the remaining 22 were determined by pathologists as reactive tissue without any malignant proliferation. This diagnosis corresponded with the results of B-cell clonality analysis in 28 cases. Only in 4 cases, the results of our analysis were different from the expected results. Based on these data, the detection rate of this method was determined as 87%

Klíčová slova

analýza monoklonální proliferace, B-lymfocytární buněčný receptor, formol-parafinové bločky, lymfocyty, lymfoproliferativní onemocnění, polymerázová řetězová reakce

Keywords

analysis of monoclonal proliferation, B-cell receptor, formalin-fixed paraffin-embedded tissue, lymphocytes, lymphoproliferative disease, polymerase chain reaction

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 2. 8. 2010

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 9. 2010
• Vedoucí: Jana Šmardová
• Oponent: Michaela Šváchová

Univerzita Palackého

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie