Stanovení kyseliny lipoové u nesuplementovaných jedinců

Bc. Pavel Hebelka

Master's thesis

The determination of lipoic acid in unsupplemented individuals

Anotácia:

Kyselina lipoová se skládá z 8 atomů uhlíku, 2 atomů kyslíku a 2 atomů síry, které spojují dithiolanový kruh. Díky svým silným antioxidačním vlastnostem, které vykazuje její oxidovaná i redukovaná forma se doporučuje používat tuto kyselinu jako doplněk stravy u různých onemocnění, zvláště pak u onemocnění diabetes mellitus a jeho komplikací. Novější studie se zaměřují na použití této látky u pacientů s kardiovaskulárním onemocněním. Na zvířecích modelech bylo prokázáno, že kyselina lipoová inhibuje vznik a vývoj aterosklerotického plátu, snižuje markery oxidačního stresu, které vznikají při ischemii myokardu a v neposlední řadě snižuje riziko vzniku restenózy po aplikaci stentu tím, že zvyšuje apoptózu hladkých svalových buněk v místě postižené tkáně. Její protizánětlivé účinky by mohly být využity u lékových stentů. Bylo vypracováno několik metod pro analytické stanovení kyseliny lipoové jak v moči, tak v plasmě. Avšak časová náročnost přípravy vzorku a zvláště pak vysoká pořizovací cena hmotnostního spektrometru je mnohdy neuspokojivá. V této diplomové práci se zabýváme optimalizací metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie s elektrochemickou detekcí na principu coulometrie, která by byla vhodnou a relativně dostupnou metodou pro analytické stanovení kyseliny lipoové v lidské plasmě. Navazuje na předchozí diplomové práce, u kterých se podařilo měřit kyselinu lipoovou u suplementovaných jedinců. My jsme se pokusili optimalizovat tuto metodu pro stanovení endogenních hladin kyseliny lipoové u jedinců nesuplementovaných. Z našich měření však vyplývá, že je tato metoda vhodná pouze pro stanovení kyseliny lipoové u suplementovaných jedinců.

Abstract:

The lipoic acid is composed from 8 atoms of carbon, 2 atoms of oxygen and 2 atoms of sulphur, all of which are connected into the dithiolan ring. Thanks to its strong antioxidant properties, which are present in both oxidized and deoxidized form, it is recommended to use the lipoic acid as nutritional supplement in treatment of various diseases, especially in treatment of diabetes mellitus and its complications. Some of the newer studies also discuss use of this substance by patients with cardiovascular diseases. Studies performed on animal models have shown that lipoic acid inhibits creation and development of the atherosclerotic plaque, causes decrease of the oxidative stress markers, which are generated during myocardial ischemia and also lowers the risk of formation of restenosis following insertion of a stent by increasing apoptosis of smooth muscle cells in affected tissue site. Anti-inflammatory effects of the lipoic acid could be utilized in drug stents. Several methods for analytical assessment of lipoic acid level in both urine and blood plasma were set, however a need for time-consuming preparation of the test sample and especially a high cost of the mass spectrometer is often unsatisfactory. This thesis deals with optimization of the high performance liquid chromatography method using coulometry based electrochemical detection, which would be convenient and reasonable technique for analytical determination of the lipoic acid in human blood plasma. It follows previous theses, where it was possible to determine oxidized form of the lipoic acid for supplemented individuals. Our attempt was to optimize this method to determine endogenous levels of the lipoic acid for unsupplemented individuals. Our measurements show that this method is only suitable for determination of lipoic acid for supplemented individuals.

Kľúčové slová

Kyselina lipoová, kardiovaskulární onemocnění, ateroskleróza, stent, stanovení v lidské plasmě, vysokoúčinná kapalinová chromatografie, elektrochemická detekce.

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 4. 6. 2013
• Vedúci: Mgr. Pavla Královcová, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / odbor:
Special Chemical and Biological Programmes / Analysis of Biological Materials