Využití HPLC v analytice léků se zaměřením na fenotypizaci

Veronika ČERNÁ

Bakalářská práce

HPLC in drug analysis focus on phenotype

Anotace:

SOUHRN Cílem práce bylo zavést a validovat metodu HPLC pro fenotypizaci CYP1A2. Jako modelová látka k určení katalytické aktivity CYP1A2 byl užit kofein. Kofein a jeho metabolity, paraxantin, teobromin a teofylin, byly stanoveny ve vzorcích séra a moče. Validace metody byla zahájena testováním selektivity nulového séra s cílem zjistit, zda neinterferují píky ze séra s píky měřených látek. Na analýzu se použila testovací chromatografická kolona 250 x 3 mm a ternární mobilní fáze ve složení voda: metanol: acetonitril v poměru 85:10:5. Průtok mobilní fáze byl 1 ml/min a detekce probíhala při vlnové délce 272 nm. Parametry metody pro moč i krev byly následující : hodnoty variačních koeficientů se pohybovaly do 10 %, hodnoty recovery dosahovaly v průměru 105 %. Linearita byla ověřena kalibrací složenou ze 7 bodů, zvlášť pro moč a pro krev. Korelační koeficienty se pohybovaly u všech látek, kofeinu i metabolitů, v moči i séru v rozmezí 0,997 ? 0,999. Mez detekce pro jednotlivé látky byla mezi 0,1-0,2 ug/ml a mez kvantifikace 0,3-0,5 ug/ml. Oba údaje byly vypočteny na základě šumu nulové linie. Výsledky validačních parametrů potvrdily, že metoda je přesná a správná. Metoda byla otestována analýzou vlastních vzorků, moči a séra. Moč byla sbírána v intervalu 0 - 4 a 4 - 8 hodin a krev po 1 a po 3 hodinách po vypití kávy. Z výsledných hodnot byl vypočten metabolický poměr pro kofein a paraxantin, který je hlavním metabolitem biotransformace kofeinu a reprezentuje přibližně 80 % metabolizovaného kofeinu.

Abstract:

SUMMARY The aim of this work was an implementation and validation of a method HPLC for phenotypification CYP1A2. An caffeine was used as a model material to determination of catalytic activity CYP1A2. The caffeine and its metabolites, paraxanthine, theobromine and theophylline were determined in samples of serum and urine. The validation of the method began by testing of zero serum selectivity and the aim was the finding whether peaks from serum don?t interfere with peaks of tested materials. Test chromatographic column 250 x 3mm and ternary mobile phase in composition water: methanol: acetonitrile in proportion 85:10:5 was used for an analysis. A mobile phase?s flow rate was 1ml/min and detection proceeded at wave-length 272 nm. The method?s parameters for the urine and blood were following: values of variation coefficients ranged to 10%, values of recovery reached at average 105%. A linearity was verified by calibration composited from 7 points, separately for urine and blood. Correlation coefficients ranged at all materials, caffeine and metabolites, in urine and serum from 0,997 to 0,999. Limit of detection for particular materials was between 0,1 - 0,2 ug/ml and limit of quantitation 0,3-0,5 ug/ml. Both data were based upon the zero line?s signal noise. The results of validation?s parameters confirmed that the method is exact and rorrect. The method was tested by analysis of own urine and blood samples. The urine was gathered at 0-4 and 4-8 time period and the blood one and three hours after drinking out the coffee. Metabolic ratio for caffeine and paraxanthine, which is the main metabolite of the caffeine biotransformation and represents approximately 80% of metabolized caffeine, was counted from consequent values.

Klíčová slova

vysokoúčinná kapalinová chromatografie, kofein a metabolity, CYP1A2

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 4. 2008

Zveřejnit od: 30. 4. 2008

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 6. 2008
• Vedoucí: RNDr. Hana Brozmanová, CSc.

OSTRAVSKÁ UNIVERZITA V OSTRAVĚ

Lékařská fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Specializace ve zdravotnictví / Zdravotní laborant