Sledování frekvence vybraných chromozomálních aneuploidií ve spermiích dárců metodou fluorescenční in situ hybridizace (FISH)

Bc. Tereza KRŠJAKOVÁ

Bachelor's thesis

Analysis of chromosomal aneuploidies in sperms of donors using FISH

Abstract:

Aneuploidie ve spermiích mohou být přímým důsledkem vrozených chromozomálních abnormalit nebo jsou způsobeny meiotickými chybami vyvolanými změnami testikulárních podmínek. Vyšší četnost aneuploidií ve spermiích je úzce spjata s infertilitou, ale aneuploidie se běžně vyskytují i ve spermiích zdravých fertilních mužů. Aneuploidie germinálních buněk jsou hlavní příčinou spontánních abortů a vývojových vad, proto je vyšetření jejich četnosti nezbytnou součástí preimplantační genetické diagnostiky (PGD). Experimentální část předkládané práce se zabývá analýzou vybraných numerických chromozomálních abnormalit a mikrodelecí ve spermiích a somatických buňkách (nekultivovaných lymfocytech periferní krve, respektive buňkách bukální sliznice) zdravých mužů. Věk vyšetřovaných mužů se pohyboval v rozmezí 23 až 30 let. Cílem bylo vyšetřit vzorky 5 dárců s využitím interfázní fluorescenční in situ hybridizace (I-FISH) s centromerickými (LPE 13G/R, LPE 18G/R, Xcen(DXZ1),Yghet(DYZ1)) a lokusově specifickými sondami (Prader-Willi Angelman SNRPN region probe/q22 (control), DiGeorge/VCFS TUPLE1 Region Probe and 22q13.3 Deletion Syndrome Probe). Četnost aberací autozomů i pohlavních chromozomů se pohybovala v rozmezí 0 až 1 %. Byly pozorovány pouze dizomické nebo diploidní spermie. Žádné jiné numerické abnormality (nulizomie, trizomie) ani mikrodelece nebyly ve spermiích zaznamenány. Ve vzorcích somatických buněk dárců nebyly detekovány žádné buňky s numerickými abnormalitami ani s mikrodelecemi. Interfázní fluorescenční in situ hybridizace na dekondenzovaných jádrech spermií se ukázala jako účinný nástroj pro molekulárně cytogenetické vyšetření spermií. Protokol I-FISH byl optimalizován pro rutinní použití.

Abstract:

Sperm aneuploidies are direct result of constitutional chromosomal abnormalities or are caused by meiotic errors induced by altered testicular conditions. Higher frequency of sperm aneuploidies is closely related to infertility, but aneuploidies occur commonly even in sperms of healthy fertile men. As germinal aneuploidies are major cause of spontaneous abortions and developmental defects, the assesment of their frequency is a fundamental part of preimplantation genetic diagnosis (PGD). Experimental part of submitted bachelor thesis deals with analysis of selected numerical chromosomal aberrations and microdeletions in sperms and somatic cells (uncultured peripheral blood lymphocytes and buccal cells respectively) of healthy men. The age of examined men ranged from 23 to 30 years. The aim was to examine specimens from 5 donors by using interphase fluorescence in situ hybridization (I-FISH) with centromeric (LPE 13G/R, LPE 18G/R, Xcen(DXZ1),Yghet(DYZ1)) and locus specific probes (Prader Willi Angelman SNRPN region probe/q22 (control), DiGeorge/VCFS TUPLE1 Region Probe and 22q13.3 Deletion Syndrome Probe). Aberration rate varied from 0 to 1 % both per autosome and sex chromosomes. Only sperms with disomy or diploidy were observed, neither other numerical abnormalities (nullisomy, trisomy) nor microdeletions were detected. No cells with numerical abnormalities or microdeletions were detected in the examined samples of donors? somatic cells. Interphase fluorescence in situ hybridization in decondensed sperm nuclei showed to be an effective tool for molecular cytogenetic diagnosis of sperms. I-FISH protocol was optimized for routine application.

Keywords

aneuploidie, fluorescenční in situ hybridizace, mužská infertilita, meióza, spermie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 5. 2011

Accessible from:: 6. 5. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2011
• Supervisor: RNDr. Pavlína Čapková, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology