Testování ofatumumabu na buňkách chronické lymfocytární leukémie (CLL) s defektem v genech TP53 a ATM

Bc. Martin Šrámek

Master's thesis

Testing of ofatumumab on chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells with the defects in TP53 and ATM genes

Abstract:

Chronická lymfocytární leukémie je nečastější formou leukémie v rámci západního světa. CLL pacienti nesoucí mutace v genech TP53 a ATM trpí agresivní formou této nemoci. Účinky monoklonálních protilátek by měly být do značné míry nezávislé na indukci apoptózy v cílových buňkách a tyto protilátky by tak měly být při léčbě schopné obejít obtíže spojené s defekty v genech ATM a TP53. Hlavním cílem diplomové práce bylo testovat in vitro primární odpověď CLL buněk s definovanými abnormalitami na monoklonální protilátky ofatumumab a rituximab. In vitro analýzy byly provedeny na 70 charakterizovaných CLL vzorcích pomocí metody WST-1. Byly pozorovány značné rozdíly v citlivosti na monoklonální protilátky ofatumumab a rituximab mezi jednotlivými genetickými skupinami. Skupina vzorků s mutací v genu TP53 byla v průměru nejvíce rezistentní a skupina vzorků s mutací v genu ATM byla naopak nejvíce citlivá (byl pozorován statisticky významný rozdíl mezi těmito dvěma skupinami; P = 0,0018 pro ofatumumab a P = 0,017 pro rituximab). S ohledem na tyto výsledky se domníváme, že jak ofatumumab, tak i rituximab, způsobují v CLL buňkách do značné míry indukci apoptózy a je možné, že zmíněné monoklonální protilátky vyvolávají v buňkách další, blíže neurčený proces podobný odpovědi na poškození DNA, který je spojený s následnou aktivací proteinů p53 a ATM.

Abstract:

Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the most common leukemia in the western world. High-risk CLL patients harboring the TP53 or ATM defects have an aggressive disease. Monoclonal antibodies are supposed to act primarily independently on apoptosis induction and should, therefore, bypass a block imposed by the TP53 or ATM defects. The major objective of this diploma thesis was to test in vitro a primary response of chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells with defined abnormalities in TP53 and ATM genes to monoclonal antibodies ofatumumab and rituximab. In vitro analysis was performed on seventy characterized CLL samples using viability assay WST-1. We observed substantial differences in the sensitivity to both ofatumumab and rituximab between the tested genetic groups; the p53-mutated group was on average the most resistant and ATM-mutated group was the most sensitive (statistical difference between the groups: P = 0,0018 for ofatumumab; P = 0,017 for rituximab). Therefore we hypothesize that both ofatumumab and rituximab act to a large extent through induction of apoptosis in CLL cells or – alternatively or possibly in parallel – that the tested monoclonal antibodies induce some processes resembling DNA damage with the subsequent activity of p53 and/or ATM.

Keywords

chronická lymfocytární leukémie, CLL, rituximab, ofatumumab, monoklonální protilátky, chronic lymphocytic leukemia, monoclonal antibodies

Language used: English

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2012

Thesis defence

• Date of defence: 14. 6. 2012
• Supervisor: doc. Mgr. Martin Trbušek, Dr.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Molecular Biology and Genetics