Analýza exprese ROR1 v buňkách chronické lymfocytární leukémie

Bc. et Bc. Igor Greif

Master's thesis

ROR1 expression analysis in chronic lymphocytic leukemia cells

Abstract:

ROR1 (transmembrane tyrosine kinase receptor) is a key component of WNT/PCP signaling pathway expressed on the surface of chronic lymphocytic leukemia cells (CLL), but not on healthy B-cells or other blood cells. The aim of this diploma thesis was to analyse ROR1 expression in B-cells of CLL patients in different stage of disease. Flow cytometry analysis confirmed ROR1 expression in CLL cells in both treated and untreated patients. We also confirmed ROR1 expression on mRNA level using qRT-PCR a and showed that the average rate of ROR1 gene expression detected in treated patients was twice as high as in untreated patients. We also tested ROR1 as a marker for CLL cell separation methods. Comparing several separation procedures we confirmed that ROR1 protein is a suitable marker and that the separation methods based on cell surface ROR1 expression are efficient in separating CLL cells from healthy B-cells in patients with low CLL cell proportion. Our results also confirmed that ROR1 epression is neither decreasing nor disappearing due to the therapy effect. Therefore ROR1 is undoubtedly a perspective therapeutic target which can be successfully used in cell separation.

Abstract:

ROR1 (transmembránový tyrosinkinázový receptor) je klíčový komponent WNT/PCP signální dráhy, který je exprimován na povrchu buněk chronické lymfocytární leukémie (CLL), ale ne na zdravých B-lymfocytech a ostatních krevních buňkách. Cílem této diplomové práce byla analýza exprese ROR1 na B-lymfocytech u pacientů s CLL v různých stavech onemocnění. Analýzou pomocí průtokové cytometrie jsme potvrdili expresi ROR1 proteinu na buňkách CLL u léčených i neléčených pacientů. Současně jsme expresi ROR1 ověřili na úrovni mRNA metodou qRT-PCR. U léčených CLL pacientů jsme detekovali průměrně dvojnásobnou míru exprese genu ROR1 v porovnání s neléčenými pacienty. Dále jsme testovali možnost využití ROR1 jako znaku pro cílenou separaci CLL buněk. Porovnáním několika separačních postupů jsme potvrdili, že protein ROR1 je vhodným cílem pro separaci CLL buněk, a že separace založené na expresi ROR1 proteinu na buněčném povrchu jsou vhodné pro oddělování CLL buněk od zdravých B-lymfocytů i u pacientů s nízkým podílem CLL buněk. Naše výsledky rovněž potvrdily, že exprese ROR1 neklesá ani nemizí vlivem terapie. ROR1 je tedy nepochybně perspektivní terapeutický cíl, který se navíc dá s úspěchem využít při separaci buněk.

Keywords

ROR1, chronická lymfocytární leukémie, průtoková cytometrie, separace nádorových buněk, qRT-PCR, PCP signální dráha, PCP signaling pathway, chronic lymphocytic leukemia, flow cytometry

Language used: Slovak

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 5. 2016

Thesis defence

• Date of defence: 6. 6. 2016
• Supervisor: Mgr. Jana Kotašková, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Experimental Biology / Molecular Biology and Genetics