Analýza tetraspaninů u nádorových onemocnění B buněk

Bc. Veronika Motúzová

Master's thesis

Analysis of tetraspanins in human B cell malignancies

Abstract:

Chronická lymfocytární leukémie (CLL) patří mezi nejrozšířenější typy leukémie u dospělých v západních zemích. Heterogenní klinický průběh je výzvou pro objev nových prognostických biomarkerů či terapeutických cílů. Transmembránové proteiny tetraspaniny podílející se na mezibuněčných procesech mohou být klíčové v karcinogenezi. Také přítomnost plazmacytoidních dendritických buněk, které produkují interferony a vykazují cytotoxickou aktivitu, společně s overexpresí EphA2 receptoru účastnícího se při mezibuněčných interakcích může ovlivnit maligní progresi a prognózu pacientů s nádorovým onemocněním. Cílem této práce bylo analyzovat tetraspaniny CD9, CD63 a CD81, plazmacytoidní dendritické buňky a EphA2 expresi u nádorových buněčných linií a v periferní krvi zdravých dárců a pacientů s CLL. Imunofenotypizace byla provedena průtokovou cytometrií. Bylo analyzováno celkem 40 pacientů s CLL a 10 zdravých dárců. Pacienti byli rozděleni podle mutačního statusu IgVH genu známého u všech pacientů. Marker CD38 byl analyzován pro rozlišení mutovaného a nemutovaného IgVH. Data z cytogenetiky dostupná u 23 pacientů ukázala nízkou přítomnost mutace genu TP53, delece 11q, delece 17p a trisomie 12, a delece 13q se vyskytovala u větší poloviny pacientů. U CLL pacientů s horší prognózou byla zjištěna vyšší exprese tetraspaninů CD9 a CD63 a snížená exprese CD81 na nádorových B buňkách v periferní krvi v porovnání se zdravými dárci. U B-CLL buněk byla navíc prokázána pozitivní korelace mezi expresí CD63 a markerem CD38. Dále byla zjištěna přítomnost plazmacytoidních dendritických buněk v periferní krvi CLL pacientů, a to s vyšší expresí EphA2 receptoru v případech s horší prognózou.

Abstract:

Chronic lymphocytic leukaemia (CLL) is one of the most common types of leukaemia in adults in Western countries. The heterogeneous clinical course challenges the discovery of new prognostic biomarkers or therapeutic targets. Transmembrane proteins tetraspanins involved in intercellular processes may be crucial in carcinogenesis. Also, the presence of plasmacytoid dendritic cells (pDCs), which produce interferons and exhibit cytotoxic activity, together with overexpression of the EphA2 receptor participating in cell-cell interactions may influence malignant progression and prognosis of cancer patients. The aim of this study was to determine tetraspanins CD9, CD63 and CD81, plasmacytoid dendritic cells and EphA2 expression in cancer cell lines and in peripheral blood of healthy donors and CLL patients. Immunophenotyping was performed by flow cytometry. A total of 40 CLL patients and 10 healthy donors were analysed. Patients were divided according to the IgVH gene mutation status. The CD38 marker was determined to distinguish between mutated and non-mutated IgVH gene. Cytogenetic data available for 23 patients showed a low presence of TP53 gene mutation, 11q deletion, 17p deletion and trisomy 12, and the 13q deletion was present in more than half of patients. In CLL patients with worse prognosis, higher expression of tetraspanins CD9 and CD63 and lower expression of CD81 on tumour B cells in peripheral blood have been found compared to healthy donors. In addition, a positive correlation between CD63 and CD38 marker expression was found on B-CLL cells. Furthermore, the presence of pDCs in the peripheral blood of CLL patients was detected, with higher expression of the EphA2 receptor in cases with a worse prognosis.

Keywords

tetraspaniny, CD9, CD63, CD81, plazmacytoidní dendritické buňky, EphA2, chronická lymfocytární leukémie, CD38, B buněčné malignity

Language used: English

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 1. 2023

Thesis defence

• Date of defence: 7. 2. 2023
• Supervisor: Mgr. Andrea Knight, Ph.D.
• Reader: Mgr. Pavlína Janovská, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Experimental Animal Biology and Immunology / Immunology